Что означает эмбрион 4ав
Оценка качества яйцеклеток и эмбрионов при ЭКО
Качество яйцеклеток и качество эмбрионов при ЭКО играет очень важную роль, значительно влияя на успешность применения этой репродуктивной технологии.
От качества взятых женских и мужских половых клеток и от того, как произошло оплодотворение, во многом зависит, будет ли попытка ЭКО неудачной или же наступит долгожданная беременность, которая приведет к рождению здорового ребенка. Поэтому технология экстракорпорального оплодотворения предусматривает оценку качества эмбрионов и яйцеклеток.
Как же определить качество яйцеклетки, и как проводится оценка качества эмбрионов?
Оценка качества яйцеклетки
Для успешного оплодотворения нужны зрелые яйцеклетки, которые будут способны взаимодействовать со сперматозоидом. Как правило, у молодых женщин достаточно хорошее качество ооцитов. Однако после 35 лет оно заметно ухудшается. Специальная гормональная стимуляция, проводящаяся перед забором яйцеклеток, позволяет ускорить их созревание. Однако даже после стимуляции ооциты могут оставаться недостаточно зрелыми и качественными.
Как проверить качество яйцеклетки?
Оценка ооцита проводится сразу после их забора из яичников женщины. При этом проверка качества яйцеклетки представляет собой визуальное наблюдение, которое осуществляется с помощью бинокулярного микроскопа.
Качество ооцитов определяется по внешнему виду цитоплазмы, вителлинового слоя, полярного тельца. При хорошем качестве — цитоплазма должна быть однородной, одного цвета и с отсутствием гранул. О плохом качестве яйцеклетки говорит присутствие вакуолей, темная окраска, гранулы, деформации.
Проверка качества яйцеклетки позволяет провести отбраковку наиболее некачественных экземпляров и тем самым выбрать наиболее подходящий для процедуры ЭКО генетический материал. Зрелый ооцит обозначают аббревиатурой MII.
Кроме того необходимо проверить качество спермы мужчины и на основе полученных результатов определить способ оплодотворения с применением технологии ЭКО или ИКСИ. Оба репродуктивных метода представляет собой оплодотворение «в пробирке», но в первом случае сперматозоиды должны самостоятельно оплодотворять яйцеклетки, а во втором — сперматозоид искусственно вводится в яйцеклетку.
Проверка качества эмбрионов в первые дни после оплодотворения
Качество эмбрионов впервые определяют через 18-20 часов после процедуры оплодотворения. В это время эмбриолог может сделать выводы, произошло ли нормальное оплодотворение, и образовалась ли зигота. Он определяет, присутствуют ли 2 пронуклеуса, оценивает их качество, симметричность, внешний вид.
На вторые сутки происходит дробление зиготы — появляются дочерние клетки — бластомеры. Качество бластомеров на этом этапе определяется по размерам, форме, также определяется степень фрагментации.
Если внутри эмбриона много бластомеров и низкая степень фрагментации (объем безъядерных элементов цитолазмы), то эмбрион считается качественным.
В эмбрионологии используется специальная классификация качества эмбрионов:
Также в этой классификации присутствуют цифры, указывающие на количество бластомеров. Чем больше цифра, тем лучше эмбрион.
На третий день в эмбрионе уже от 7 до 9 бластомеров. В этот период могут возникать «генетические поломки», приводящие к остановке развития эмбриона.
На четвертый день в зародыше уже присутствует 10-16 бластомеров.
На пятый день эмбрион переходит в стадию бластоциста.
Качество эмбрионов на стадии бластоцисты
На стадии бластоцисты у эмбриона уже появляется полость, которая достигает 50% от общего объема, и есть два типа клеток, которые образуют наружный и внутренний слои. Качество бластоцист определить очень важно, потому что именно на этой стадии происходит подсадка эмбриона в полость матки женщины.
На этой стадии эмбрион окружен оболочкой. После перемещения в матку эта оболочка разрывается и у бластоцисты появляется возможность прикрепиться к стенке матки.
Качество бластоцист определяется несколькими критериями: размер внутренней полости и степень проникновения эмбриона за оболочку, количество клеток и их плотность, состояние наружного слоя.
Размер внутренней полости определяет степень зрелости бластоцисты:
1 — если полость внутри эмбриона менее 50% от его объема (ранняя бластоциста);
2 — полость внутри эмбриона больше 50%;
3 — полость занимает весь объем эмбриона;
4 — полость увеличивается, а оболочка эмбриона становится тоньше;
5 — наружный слой бластоцисты проникает сквозь блестящую оболочку;
6 — бластоциста покидает оболочку.
Количество клеток и их плотность:
А — много плотно расположенных клеток.
В — среднее количество клеток внутри бластоцисты.
С — клеток внутри бластоцисты мало.
Состояние наружного слоя:
А — много клеток;
В — среднее количество клеток.
С — мало клеток.
Согласно этой классификации качество эмбрионов 4АА будет лучше, чем качество эмбрионов 2ВВ.
Бластоцисты 3АА, 4АА, 5АА, 6АА относят к эмбрионам хорошего качества. Бластоцисты 1АВ, 2ВВ и т.д. — среднего качества. Бластоцисты, в аббревиатуре которых есть «С» — плохое качество.
Чем выше будет качество эмбрионов при подсадке в матку, тем больше шансов будет, что процедура ЭКО окажется успешной.
Обычно во время процедуры выбирается 1 или 2 наивысшего качества эмбриона при подсадке в матку. Если было получено больше качественных эмбрионов, то «лишние» экземпляры замораживаются. Они могут быть использованы позже, если данный перенос не завершиться беременностью. При замораживании эмбрионов используется специальный метод быстрой заморозки, что позволяет сохранить их жизнеспособность.
Оценка качества ооцитов и эмбрионов
Все пациенты интересуются качеством полученных клеток, а в дальнейшем и качеством эмбрионов. Однако данный вопрос многофакторный и не имеет однозначного ответа. Начнем с начала. Первый вопрос, который задают пациенты, когда к ним в палату после процедуры забора ооцитов приходит эмбриолог, звучит всегда одинаково: «А клетки у меня хорошие?». Хочется сразу заметить, что на этот вопрос очень сложно ответить на данном этапе программы ВРТ. Первичная оценка ооцита основана на непосредственном визуальном анализе морфологии ооцит-кумулюсного комплекса. При получении ооцитов эмбриолог смотрит на клетки через бинокулярный микроском с незначительным уровнем увеличения. Выглядит это вот так:
В данной ситуации оценить детально качество ооцитов не представляется возможным. Эмбриолог может только делать предположения. Поэтому оценка ооцитов на этапе проведения трансвагинальной пункции яичников не проводится.
После забора ооцитов эмбриолог определяется с тем, каким методом проводить оплодотворение полученных клеток.
Метод оплодотворения выбирается на основании показателей мужского материала. Если показатели спермограммы снижены – выбирается метод ICSI. Суть его заключается в том, что эмбриолог очищает ооциты от клеток кумулюса и с помощью специальных инструментов, работая на специальном микроскопе, вводит морофологически хороший, активно-подвижный сперматозоид внутрь клетки. Перед тем как ввести сперматозоид в клетку, его обездвиживают. Данный метод оплодотворения предлагается также парам с бесплодием неясного генеза и пациентам, планирующим проведение преимлантационной генетической диагностики. Помимого этого, ИКСИ может быть проведено по желанию пациента.
При хороших показателях спермограммы проводится оплодотворение методом ЭКО. В чашке со специальной средой соединяют сперматозоиды и ооциты, а оплодотворение происходит естественным способом.
Итак, поговорим более подробно о зрелости и качестве ооцита.
Созревание ооцита до состояния, когда он способен к оплодотворению, происходит в процессе стимуляции суперовуляции, проводимой врачом гинекологом-репродуктологом. Не все ооциты в процессе стимуляции достигают зрелости.
Зрелый ооцит выглядит так
При оплодотворении методом ЭКО такую оценку не проводят. Возможность оценить клетки в данной ситуации возникает только утром следующего дня, а в это время не всегда возможно понять, какими клетки были в момент пункции, т.к. они имеют возможность пройти процесс дозревания в условиях инкубатора.
Что такое качество ооцита
Качество ооцита характеризует внешний вид цитоплазмы, вителлинового слоя, полярного тельца. Гомогенная цитоплазма с однородным цветом и отсутствием гранулярности характеризует хорошее качество ооцита. Вакуоли, темная окраска, всевозможные включения, деформация или гранулярность расцениваются при морфологической оценке качества ооцита как негативные признаки.
Ооцит плохого качества, с гранулированной цитоплазмой и вакуолью большого размера в центре.
Оценка оплодотворения в стадии бластоцисты
Оценка оплодотворения проводится утром следующего за пункцией дня. Этот день считается 1-м днем эмбрионального развития.
Возможность понять, произошло ли оплодотворение клетки, появляется через 18 часов после оплодотвоерния и характеризуется формированием пронуклеусов. Эмбрион первых суток развития называется зиготой.
На этот день эмбриолог оценивает «правильность» оплодотворения. Нормально оплодотворившийся ооцит содержит 2 пронуклеуса. Все остальные варианты считаются отклонением.
Триплоидный эмбрион (3pn)
Аномально оплодотворившиеся эмбрионы исключаются из культивирования.
Оценка качества эмбрионов 2-3 дня развития
Начиная со вторых суток эмбрионального развития начинается фаза дробления.
Эмбрион хорошего качества выглядит так.
4-е сутки эмбрионального развития
На 4-е сутки развития эмбрион человека состоит уже, как правило, из 16-18 клеток, межклеточные контакты постепенно уплотняются, и поверхность эмбриона сглаживается. Этот процесс называется компактизацией. Важно понимать, что до 3-х суток дробление эмбриона происходит механически, каждая клетка делится пополам, черпая энергию из запасов ооцита. Начиная с 4 суток эмбрионального развития начинается дифференциация клеток эмбриона, часть из них сформируют зародыш, остальные будут обеспечивать возможность имплантации и формирования плаценты.
На данном этапе эмбрионы наиболее чувствительны к отрицательным воздействиям.
Качество бластоцисты, которая сформируется из морулы, оценить практически невозможно.
Оценка качества морулы проводится по характеристикам компактизации:
Морулы отличного качества
Морула плохого качества
Далее внутри морулы начинает формироваться полость. Когда эта полость достигает достигает 20% от ее объема, эмбрион называется бластоцистой. В норме формирование бластоцисты допускается с конца 4-х по середину 6-х суток развития, но чаще это происходит на 5-е сутки. В редких случаях возможно формирование бластоцисты к 7-м суткам эмбрионального развития.
Бластоциста состоит из двух популяций клеток, таких как: трофэктодерма (однослойный эпителий, окружающий полость) и внутренняя клеточная масса (плотное образование из клеток внутри бластоцисты). Из трофэктодермы сформируется в дальнейшем плацента и все зародошевые оболочки. Из внутренней клеточной массы будут формироваться все ткани и органы будущего ребенка. На данном этапе развития эмбрион оценивают по 3 критериям:по размеру полости, качеству трофэктодермы и качеству внутриклеточной массы.
Размер полости оценивают цифрой от 1-ого до 4-х. Внутриклеточную массу и трофэктодерму оценивают буквами от А до С. Первая буква в оценке качества будет относится к внутриклеточной массе, вторая – к качеству трофэктодермы. Если бластоциста успела совершить «хетчинг» (разрыв оболочки, окружающий эмбрион), такой бастоцисте присваивается цифра 5. Если же бластоциста успела полностью выбраться из оболочки после хетчинга, такую бластоцисту обозначат цифрой 6. Размер полости имеет меньшее значение в определении качества эмбриона, чем буквенная классификация. Ввиду того, что эмбрионы имеют индивидуальные особенности, они могут развиваться неравномерно. Любой размер полости определяется как вариант нормы. Буквенные обозначения следует понимать так: наивысшее качество оценивается буквой А, наихудший вариант развития внутриклеточной массы и трофэктодермы обозначается буквой С.
Важно понимать, что критерии оценки эмбрионов носят субъективный характер. Даже эмбрионы, оцененные по классификации как эбмрионы среднего и ниже среднего качества, могут дать полноценную беременность.
Эмбриологический протокол
Эмбриологический протокол
Оплодотворение методом ЭКО
Данная оценка осуществляется эмбриологом визуально. В этом случае нельзя со полной уверенность судить о зрелости ооцитов, так как для такого оплодотворения ооциты не очищаются от клеток кумулюса. Если ОКК выглядит плотным и темным, то он оценивается эмбриологом как «0». Если ОКК выглядит рыхлым и прозрачным, то он, как правило, содержит зрелый ооцит и получает оценку «1». Если на следующий день, после очистки ооцитов от клеток кумулюса и проверки оплодотворения, данный ооцит действительно был зрелым, то оценка выглядит как «1–1», если ооцит оказался не зрелым, то оценка будет «1–0».
Оплодотворение методом ИКСИ
Данная оценка проводится через час после получения ОКК, которые обрабатываются ферментом, чтобы отделить ооциты от лишних клеток. В этом случае эмбриолог с уверенностью может говорить о количестве зрелых (пригодных для оплодотворения) ооцитов.
Только хорошие ооциты подходят для оплодотворения
Эмбриолог следит за действием буквально по часам, т.к возможны разные аномальные варианты развития, которые в клинике обязательно отслеживают и культивируют отдельно. Через 16–18 часов после проведения оплодотворения в ооците появятся специфические округлые структуры — пронуклеусы. Это предшественники ядер, содержащие генетический набор как мамы, так и папы.
Ооциты (NF, 1PN) откладываются в отдельныю капли и за ними также наблюдают. Если из такого ооцита получается отличный эмбрион, то вопрос о его переносе или заморозки решается совместное с репродуктологом, эмбриологом и пациентом.
Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение 6 дней.
Одноступенчатые среды
Для культивирования эмбрионов в клинике используются передовые одноступенчатые среды, которые позволяют «оставить в покое» эмбрионы до 5го дня развития.
Через сутки эмбрион уже состоит из 6–8 бластомеров. До этого момента эмбрион развивался исключительно на материнских «запасах», накопленных в яйцеклетке за время ее роста и развития в яичнике. Однако если «генетическая программа», в которой закодированы этапы нормального развития эмбриона, содержит ошибки, эмбрион (4–19% случаев) останавливается в развитии не достигнув стадии бластоцисты — так называемый «блок развития». Это природный процесс отбора генетически нормальных эмбрионов.
Наиболее точная (эффективная) оценка эмбрионов происходит на стадии бластоцисты (5–6 день после оплодотворения). И если «лучшая» бластоциста выросла из «худшего» ооцита, максимальные шансы на успешное ЭКО будут все‐таки у нее. Поэтому, уважаемые пациенты, не стоит узнавать ежедневно судьбу каждого эмбриончика. Наберитесь терпения, скоро все станет предельно ясно!
Эмбриологи используют численно–буквенную систему оценки качества, где первая цифра означает количество бластомеров, буква их качество, а вторая цифра оценка фрагментации.
Классификация бластоцит
Столбец 5, 6 — день переноса и/или криоконсервации (день 5 и 6).
При классификации бластоцист в обозначении указывают цифру от 1 до 6 (степень развития эмбриона):
Буквенное обозначение
Качество внутриклеточной массы, из которой будет развиваться зародыш:
Качество трофэктодермы (TE), которая обеспечит прикрепление эмбриона к эндометрию и разовьется в плаценту
У вас остались вопросы?
Наша клиника готова ответить на все интересующие вас темы, и поддержать в трудные минуты. Просто оставьте заявку, и мы свяжемся с вами для обсуждения всех деталей.
Оценка качества эмбрионов в программах ЭКО
Несмотря на то что результативность программ ЭКО зависит от множества факторов, главным и решающим этапом, практически определяющим успешность программы, является эмбриологический. А так как различные манипуляции с эмбрионом человека – это передний край современной науки, можете представить себе сложность терминологии, которую используют эмбриологи в своей повседневной деятельности. Ясности не добавляет и обилие различных классификаций и методов оценки качества используемых клеток.
Мы постараемся доступным языком объяснить, что подразумевается под непонятными сочетаниями букв и цифр и дать понимание того, на основе каких данных врачи принимают решения и дают прогнозы на исход программ ЭКО.
Главный эмбриолог, к.б.н.
Хотим сразу предупредить — ни в коем случае не стоит забывать, что для того, чтобы самостоятельно оценить перспективы и принять решение о переносе эмбриона нужно быть настоящим специалистом, имеющим помимо специального образования достаточный опыт.
В каждом конкретном случае решение и прогноз основывается на совокупности всех известных данных и чаще всего является коллективным решением врача и эмбриолога. Главная сложность состоит в том, что каждому этапу развития эмбриона соответствует своя система оценки качества и способ записи этой оценки. И для того чтобы понимать обозначения вроде «8с» необходимо хотя бы немного разобраться в содержании этих этапов и сопутствующих терминах.
День первый
На первом этапе эмбриолог оценивает признаки оплодотворения после проведенной процедуры ЭКО, ИКСИ, ИМСИ или PICSI. На этом этапе в эмбрионе оценивают наличие, количество, симметричность, внутреннее строение и внешний вид пронуклеусов.
Пронуклеусы — это ядра мужской и женской половых клеток еще не слившихся и несущих одинарный набор хромосом.
По их количеству и внешнему виду оценивают жизнеспособность эмбриона и перспективы возникновения патологий. В норме их должно быть два, они должны иметь относительно равные размеры, находиться рядом и иметь внутри «ядрышки» — пронуклеоли тоже в определенном количестве и расположенные определенным образом. На этом этапе может формироваться множество патологий, например, при присутствии только одного пронуклеуса оплодотворение и не сможет произойти, ведь именно это образование и есть носитель генетического материала, а без участия противоположного пола размножаться мы еще не научились. Пронуклеусов может оказаться и три. Такие эмбрионы часто несут аномальный, тройной набор хромосом и нежизнеспособны. Обычно они погибают до имплантации (прикрепления к стенке матки) или приводят к замершей беременности. Такие эмбрионы отбраковываются и не используются в программах ЭКО.
День второй
Вторые сутки знаменуются соединением ядер женской гаметы и мужской, а также процессом дробления зиготы, которая на этой стадии становится эмбрионом. Численность бластомеров (эмбриональных клеток) – 2–4, но их объем не увеличивается.
Дробление эмбрионов оценивается специалистом по таким критериям:
Уровень фрагментации и численность бластомеров классифицируется по типам следующим образом:
Самый качественный эмбрион — 4А, где 4 — количество бластомеров, А — отсутствие фрагментации.
Эмбрион на второй день
День третий
Продолжается дробление эмбриона, у которого насчитывается от 4 до 9 бластомеров. В начале третьего дня развития запускается собственная генетическая программа, которая в некоторых случаях содержит «опечатки». До этого эмбрион для своего роста «пользуется» веществами, накопленными яйцеклеткой во время ее созревания. Если эмбрион имеет мутации в программе («блок развития»), то далее он не развивается. Это происходит примерно в 20% случаях.
Причиной «блока развития» может быть низкокачественная семенная жидкость или яйцеклетка. Изначальное неудовлетворительное развитие эмбриона свидетельствует о проблемах с яйцеклеткой, если эмбрион «страдает» с третьих суток культивирования, то сперма была ненадлежащего качества. «Блок развития» – это так называемый естественный отбор, эволюционный спасительный механизм, который останавливает развитие некачественных эмбрионов. Как в дальнейшем будет развиваться и расти эмбрион зависит от сформированного генома и своевременности начала его функционирования.
Эмбрион на третий день
День четвертый
К этому сроку эмбрион содержит до восьми бластомер. Клетки контактируют значительно активнее, поверхность у эмбриона немного сглаживается. Культивирование эмбриона третьи сутки характеризуется началом такого процесса, как компактизация, когда границы эмбриональных клеток различить невозможно. Компактизация бывает частичная или полная. Если этот процесс произошел на второй день, то возможно эмбрион развивается неправильно, с отклонениями, что отображается в эмбриологическом протоколе. Готовится переход эмбриона в бластоцисту.
В моруле (трехдневный эмбрион) содержится до 16 бластомеров.
При естественном зачатии на этом сроке эмбрион транспортируется из фаллопиевых труб в матку. По окончании четвертых суток происходит кавитация, когда внутри эмбриона образуется пустота. В процессе эмбрионального роста за пределы зародышевой оболочки выходит определенное количество клеток. Эти клетки при необходимости генетического исследования забирают на анализ. Диагностику проводит эмбриолог на 5–6 сутки, прокалывая зародышевую оболочку. Биопсия абсолютно безопасна для эмбриона и не вредит его развитию. До получения диагностических данных эмбрионы криоконсервируют.
Результаты исследования напрямую повлияют на дальнейшую «судьбу» эмбриона, характеристики которого никак не меняются после размораживания. Современные безопасные технологии замораживания биоматериала позволили широко внедрить в различные программы ВРТ генетическую диагностику. На четвертый день оценка эмбриона малоинформативна, но его можно оценить по численности компактизированных клеток. Чем больше таких клеток, тем вероятнее эмбрион станет бластоцистой.
Оценивание компактизации происходит по классам:
Не во всех лабораториях происходит оценка по такому критерию.
Четвертый день развития. Стадия морулы
День пятый
На данном этапе, включающем период с конца четвертого до начала шестого дня, морула, полость которой составляет половину своего объема, становится бластоцистой, состоящей из двух типов клеток:
Ооцит окружен блестящей оболочкой плотной консистенции (Zona pellucida), выполняющей две функции: она препятствует проникновению в яйцеклетку более одного спермия и удерживает вместе бластомеры. По мере роста внутриэмбриональная полость расширяется, приводя к разрыву оболочки, в результате чего происходит выход бластоцисты или «хэтчинг» (вылупление). На этом этапе оценка эмбриона происходит по таким критериям:
Качество обозначается цифрами (1–5), количество — буквами (А-С).
На пятый день бластоцисты переносят в матку или замораживают. Бластоцисты оценивают по степени зрелости (бластуляция):
Шестой день развития. Стадия бластоцисты
Оценка эмбриобласта
Важнейший критерий внутриклеточной массы (ВКМ) – плотность, сгруппированность. Эмбрион считается более качественным, если отмечается высокая плотность ВКМ.
Критерии трофэктодермы – количество и маленький размер:
Степень приживаемости эмбрионов в полости матки оценивают спустя две недели по исследованию крови на ХГЧ. Более достоверная информация будет получена с помощью УЗ-диагностики через три недели. Вероятность наступления беременности зависит во многом от качества имплантированных эмбрионов. Морфологические данные, используемые для оценивания эмбрионов, являются необходимыми и основными, но этого не всегда достаточно. Иногда при переносе высококачественных эмбрионов они не имплантируются. В других случаях при переносе эмбрионов невысокого качества наступает беременность. Поэтому эмбриологи используют дополнительные варианты оценивания, позволяющие спрогнозировать имплантацию.
Развитие эмбрионов является сложным трудоемким процессом, в котором нужно учитывать массу тонких нюансов, что под силу только высокопрофессиональным специалистам. Если в ходе проведения программы ЭКО удалось довести 40% эмбрионов до этапа бластоцисты отличного качества, то программа считается успешной.
В этом плане криотехнологии, применяемые в протоколах ЭКО, неоценимы, поскольку есть возможность не только перенести в матку высококачественные эмбрионы, но и заморозить оставшиеся. Это преимущество позволяет использовать криозамороженный биоматериал при следующем переносе, минуя несколько небезопасных для здоровья и дорогостоящих этапов.
Данная статья не может быть использована для постановки диагноза, назначения лечения и не заменяет прием врача.