Что окрашивает гематоксилин и в какой цвет
Окраска гематоксилин—эозин
Окраска гематоксилин—эозин (окраска гематоксилином и эозином) является одним из самых распространённых методов гистологии. Широко используется в медицинской диагностики, в частности в онкологии для окраски ткани, полученной при биопсии.
Окраска включает использование основного красителя гематоксилина, окрашивающего базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом, и спиртового кислого красителя эозина Y, окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК): клеточное ядро, рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы. Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточные белки, например, тельца Леви. Цитоплазма является эозинофильной средой. Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом.
Таким образом, терминология базофильная и эозинофильная структура связана с аффинностью к соответствующим красителям и не связана с кислотностью среды.
Некоторые структуры плохо прокрашиваются гематоксилином и эозином (как правило гидрофобные) и требуют иных методов окраски. Например, участки клеток, богатые липидами и миелином остаются неокрашенными: адипоциты, миелиновая оболочка аксонов нейронов, мембрана аппарата Гольджи и др.
Смотреть что такое «Окраска гематоксилин—эозин» в других словарях:
Гематоксилин — Общие Систематическое наименование цис (+) 7,11b дигидробенз[b]индено[1, 2 d]пиран 3,4,6a,9,10(6H) пентол Химическ … Википедия
Эозин Y — Общие Систематическое наименование 2 (2,4,5,7 тетрабромо 6 оксидо 3 окс … Википедия
Эозин — Y … Википедия
ОКРАСКА — (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… … Большая медицинская энциклопедия
Кожа — У этого термина существуют и другие значения, см. Кожа (значения). О коже как материале см. Кожевенное производство, Кожаные изделия, Художественная обработка кожи. Кожа наружный покров организма позвоночных, защищающий тело от широкого… … Википедия
Радиальная глия — … Википедия
Список паразитов человека — Паразиты человека это паразиты, заражению которыми подвержен человек. Общее определение слова «паразит» касается не только многоклеточных и простейших, живущих за счёт своего хозяина и во вред последнему, но также вирусов, бактерий и грибов … Википедия
ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА — ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА. Содержание: Методика гистологич. исследований. 242 Теоретические основы Г. т. 246 Гистохимия. 253 Краски, употребляемые в Г. т. 258 Гистологическая техник а техника изучения… … Большая медицинская энциклопедия
КРАСКИ — КРАСКИ, химич. вещества, обладающие свойством окрашивать другие предметы в свой или другой цвет непосредственно или с помощью другого хим. соединения протравы. Широкое применение К., надо полагать, вызывается инстинктивным стремле нием человека к … Большая медицинская энциклопедия
Замечания по технике окрашивания
код для вставки на форум:
При окраске водными красителями срезы переносят в краситель из дистиллированной воды, а при окраске спиртовыми — из соответствующего раствора спирта. После того как препарат приобретает интенсивную окраску, его промывают в воде или спирте для удаления избытка красителя (дифференцировка), контролируя этот процесс под микроскопом.
Срезы тканей после целлоидиновой и парафиновой заливки, а также полученные на замораживающем микротоме окрашивают в широкогорлых бюксах или на часовых стеклах. Одновременно окрашивают несколько срезов, промывают, дифференцируют и т.д. каждый срез отдельно.
Препараты можно помещать в красящий раствор в специальных контейнерах, предназначенных для одновременного окрашивания большого количества стекол. Если препаратов немного, то рациональнее краситель наносить непосредственно на срез по каплям с помощью пипетки. Остатки красителя можно слить в склянку и использовать повторно. Д. Кисели (1962) предлагал накрывать при этом срезы стеклянным колпаком, а для увлажнения среды оставлять под колпаком смоченную водой вату.
1. ЯДЕРНЫЕ КРАСИТЕЛИ И ИХ ПРИГОТОВЛЕНИЕ
Окрашивание ядер клеток обусловлено двумя механизмами химического взаимодействия: 1) основные красители, например анилиновые, образуют соли в присутствии ДНК и РНК; 2) образуются комплексы с ионами металлов при применении протравы. В практической работе чаще используют протравные красители. К ним относятся гематоксилин, кармин, сафранин, галлоцианин, ализарин. Хорошо окрашивают ядра такие красители, как янус зеленый, основной коричневый, оксазиновые красители (крезиловый фиолетовый, нильский голубой), тионин, азуры, метиленовый синий, основной фуксин, метиловый зеленый и др. Следует упомянуть о хороших результатах окраски ядер соком черники, которая предложена М.Д. Лавдовским еще в 1887 г.
Гематоксилин и способы его приготовления
Гематоксилин имеет растительное происхождение: его получают из эфирного экстракта кампешевого дерева. Гематоксилин хорошо растворяется в спирте и плохо в воде. Красящими свойствами обладает продукт окисления гематоксилина — гематеин, поэтому краситель становится пригодным только после созревания — окисления, на которое требуется от 10 дней до 2—3 нед. Созревание можно ускорить с помощью солей алюминия, хрома, железа и др.
Гематоксилин Эрлиха
1. Гематоксилин кристаллический 2г
3. Дистиллированная вода 100 мл
5. Алюмокалиевые или алюмоаммонийные квасцы 3г
6. Ледяная уксусная кислота 10 мл
Гематоксилин растворяют в спирте, а квасцы — в дистиллированной воде, смешивают оба раствора и затем добавляют остальные компоненты. Раствор периодически перемешивают. Через 10—14 дней он приобретает темно-вишневый цвет, что свидетельствует о готовности красителя. Продолжительность окрашивания гематоксилином Эрлиха 4—6 мин. Затем следуют промывание в дистиллированной, потом в водопроводной воде, дифференцировка в 1 % солянокислом спирте, восстановление в аммиачной воде и окончательное промывание в дистиллированной воде. Для приготовления солянокислого спирта к 100мл-70% спирта добавляют 1мл концентрированной соляной кислоты. Для приготовления аммиачной воды к 50мл дистиллированной воды добавляют 2 капли крепкого аммиака.
Гематоксилин Делафильда
1. Гематоксилин кристаллический 4гр
3. Алюмокалиевые или алюмоаммониевые квасцы 40гр
4. Дистиллированная вода 400мл
Приготовление: спирт+гематоксилин+квасцы=3-4дня на свету, перемешывая,фильтруют+100мл глицерина+100мл метилового спирта=3-4 дня на свету, фильтруют. Перед применением разбавляют в 2 раза дистиллированной водой или 2% раствором алюмокалиевых квасцов.Окрашывание 4-6 минут, промывание в дистиллированной воде, дифференцировка в солянокислом спирте, восстановление в амиачной воде, промывание в ДВ.В результате хроматин и кариолемма ярко-синие.
Гематоксилин Гарриса
1. Кристалическый гематоксилин 5 гр + спирт 50мл-96%
2. Алюмоамонийные квасцы 100гр+ ДВ 1литр
3. Смешывают + 60мл глицерина + 2,5 оксида ртути. Нагревают до 100С, остужают, фильтруют. Перед использованием до 100мл раствора добавляют 2 мл ледяной уксусной кислоты. Окраска 3-4 минуты, дает чёткие ярко-синие ядра.
Гематоксилин Гарриса в модификации Кисели
1. Кристалическый гематоксилин 1 гр + спирт 10мл-96%
2. Кристалический гематоксилин 20гр + ДВ 200мл
3. Смешивают, доводят до кипения, + 500мг желтого оксида ртути. Остужают, фильтруют, готов к использованию. Окраска 4-6 минут, дает ярко-синие ядра.
Гематоксилин Ганзена
4. Кристалическый гематоксилин 1 гр + спирт 10мл-100%
5. Алюмокалиевые квасцы 20гр+ ДВ 100мл
6. Смешывают + 3мл насыщеного раствора перманганата калия. Нагревают до 100С, остужают, фильтруют. Окраска 3-4 минуты, дает красно-фиолетовые ядра.
Гематоксилин Маллори(водный)
Кристалическый гематоксилин 2,5 гр + алюмоамонийные квасцы 50гр+ ДВ 1литр
Выдержывают 10 суток при 25С, +440мг перманганата калия и 2,5гр тимола, перемешивают,
фильтруют. Синие ядра.
Кислый гемалаун Майера(водный)
1. Кристалический гематоксилин 1 гр
2. Алюмоамонийные квасцы 50гр
4. Йодат натрия 200мг
5. Хлоралгидрат 50гр
6. Лимонная кислота 1 гр
Продолжительность окрашивания 4—6 мин.
Результат: ядра красно-фиолетовые.
Гематоксилин Кораци (водный)
1. Гематоксилин кристаллический 0,1 г
2. Йодат калия 2—3 кристал
3. Алюмокалиевые квасцы 5 г
4. Дистиллированная вода (теплая) 100 мл
Смесь перемешивают до полного растворения и добавляют 25 мл глицерина. Раствор перед использованием фильтруют. Продолжительность окрашивания 1—2 мин. Результат: ядра ярко-синие.
Железный гематоксилин Гейденгайна
1. Гематоксилин кристаллический 1 г
3. Дистиллированная вода 90 мл
Краситель созревает 4 нед. Добавление 100 мг йодата натрия ускоряет «созревание» — он готов к использованию уже через 1 ч после приготовления. Окрашивание проводят разведенным в 2 раза раствором.
Продолжительность окрашивания 1 —36 ч.
1. Препарат помещают в 2,5 % раствор железоаммонийных квасцов на 2—12 ч.
2. Ополаскивают в дистиллированной воде.
3. Окрашивают гематоксилином Гейденгайна 1—36 ч.
4. Промывают в водопроводной воде — 3 смены по 10 мин, затем обезвоживают, просветляют, заключают.
Результат: ядра и цитоплазматические структуры черные и синевато-черные.
Железный гематоксилин Брусси
1. Гематоксилин кристаллический 1 г I
2. Дистиллированная вода при 40 «С 100 мл I
3. Железоаммонийные квасцы 8 г II
4. Дистиллированная вода при 40 «С 100 мл II
Растворы I и II смешивают, фильтруют. Продолжительность окрашивания 30 с—1 мин. Затем промывают в водопроводной воде, обезвоживают, просветляют заключают.
Результат: ядра синевато-черные.
Железный гематоксилин Вейгерта
1. Гематоксилин кристаллический 1 г А
2. Спирт 96 % 100мл А
3. Раствор трихлорида железа гексагидрата 50%-4 мл В
4. Дистиллированная вода 95 мл В
5. Концентрированная соляная кислота 1 мл В
Растворы хранят в отдельных склянках с притертыми пробками. Перед использованием нужное для окрашивания количество краски получают путем смешивания растворов А и Б в пропорции 1:1.
Продолжительность окрашивания 1—2 мин, затем промывают в водопроводной воде.
Результат: ядра черно-синие.
Другие ядерные красители
Кармин
Продолжительность окрашивания 30 мин—24 ч. Затем следует промывание в дистиллированной воде, дифференцировать в солянокислом спирте, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: ядра ярко-красные.
Сафранин
Обеспечивает получение хороших результатов после фиксации ткани в тетраоксиде осмия и особенно после применении фиксаторов, содержащих хром.
Продолжительность окрашивания 24 ч. Затем следуют промывание дистиллированной водой, дифференцировка в солянокислом спирте, дистиллированная вода, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: хроматин ядер и кариолемма ярко-красные.
Галлоцианин
Рекомендуется для окрашивания тканей, залитых в желатин.
Сначала растворяют квасцы, затем добавляют Галлоцианин, раствор кипятят при постоянном помешивании, охлаждают, фильтруют. Срок годности красителя 1 мес.
Продолжительность окрашивания 24—48 ч. Затем следуют промывание в 2 сменах дистиллированной воды, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: хроматин и тигроидное вещество синевато-черные.
Сок черники
Свежие чистые ягоды черники разминают в фарфоровой ступке, смешивают с равным объемом 96 % спирта, настаивают 1— 2 сут и фильтруют. Перед окрашиванием часть раствора разводят равным количеством 2 % водного раствора алюмокалиевых квасцов и добавляют 2—3 кристаллика тимола.
Продолжительность окрашивания 5—7 мин. Затем следуют промывание в дистиллированной воде, дифференцировка в солянокислом спирте, промывание в дистиллированной воде, обезвоживание, просветление и заключение.
Результат: ядра темно-фиолетовые.
2. ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКИЕ КРАСИТЕЛИ
Окрашивание цитоплазмы клеток происходит в результате связывания оснований и белков кислотными красителями. В группу диффузных (кислых) красителей входят карбоновые и сульфоновые кислоты, нитро-, азокрасители и др. В гистологической практике постоянно применяют эозины, пикриновую кислоту, оранжевый Г, кислый фуксин, конго красный (конгорот), азокармин, эритрозин. Чаще используют 1 % водные растворы этих красителей, но можно применять и 1 % спиртовой раствор.
Продолжительность окрашивания колеблется от 5 с до 3—5 мин в зависимости от сорта и серии красителя. Если препарат перекрашивается, то излишек краски легко удаляется при ополаскивании в дистиллированной воде и последующем обезвоживании препарата или среза в спиртах.
Смесь кислого фуксина и пикриновой кислоты (пикрофуксин) готовят из насыщенного водного раствора пикриновой кислоты и 1 % водного раствора кислого фуксина (см. главу 22).
3. Методика окраски гематоксилином и эозином
Процедура окрашивания срезов, полученных на замораживающем микротоме, после парафиновой или целлоидиновой заливки различается лишь по техническим приемам, а порядок проведения окраски одинаков.
Результат: ядра синие, цитоплазма и межклеточное вещество розовые.
похожие статьи
Классификация медико-криминалистических ситуационных экспертиз / Нагорнов М.Н., Леонова Е.Н., Ломакин Ю.В., Светлаков А.В., Емелин В.В., Кочоян А.Л. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 2019. — №3. — С. 4-8.
Практическое применение источника экспертного света «Светоч-Х» в работе медико-криминалистического отделения / Девятериков А.А., Куличкова Д.В., Шаповалова Е.С. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2019. — №18. — С. 70-73.
Апробация модификации метода цветных отпечатков с использованием тонкого целлофана вместо фотобумаги / Девятериков А.А., Нестеров А.В. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2017. — №16. — С. 18-24.
Применение гематоксилина в микроскопической технике
Микроскопическая техника Гистологическая техника Гематоксилин Обзорные окрашивания Методы окраски тканей Окрашивание нервной ткани Окрашивание костной ткани Кровь: методы окраски Окрашивание азаном по методу Гейденгайна Микротом для парафиновых срезов МПС-2 | ||