Что окрашивает эозин в клетке

10.04.202222.04.2022 admin 0 Comments

Окраска гематоксилин—эозин

Окраска гематоксилин—эозин (окраска гематоксилином и эозином) является одним из самых распространённых методов гистологии. Широко используется в медицинской диагностики, в частности в онкологии для окраски ткани, полученной при биопсии.

Окраска включает использование основного красителя гематоксилина, окрашивающего базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом, и спиртового кислого красителя эозина Y, окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты (ДНК и РНК): клеточное ядро, рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы. Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточные белки, например, тельца Леви. Цитоплазма является эозинофильной средой. Эритроциты всегда прокрашиваются ярко-красным цветом.

Таким образом, терминология базофильная и эозинофильная структура связана с аффинностью к соответствующим красителям и не связана с кислотностью среды.

Некоторые структуры плохо прокрашиваются гематоксилином и эозином (как правило гидрофобные) и требуют иных методов окраски. Например, участки клеток, богатые липидами и миелином остаются неокрашенными: адипоциты, миелиновая оболочка аксонов нейронов, мембрана аппарата Гольджи и др.

Смотреть что такое «Окраска гематоксилин—эозин» в других словарях:

Гематоксилин — Общие Систематическое наименование цис (+) 7,11b дигидробенз[b]индено[1, 2 d]пиран 3,4,6a,9,10(6H) пентол Химическ … Википедия

Эозин Y — Общие Систематическое наименование 2 (2,4,5,7 тетрабромо 6 оксидо 3 окс … Википедия

Эозин — Y … Википедия

ОКРАСКА — (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… … Большая медицинская энциклопедия

Кожа — У этого термина существуют и другие значения, см. Кожа (значения). О коже как материале см. Кожевенное производство, Кожаные изделия, Художественная обработка кожи. Кожа наружный покров организма позвоночных, защищающий тело от широкого… … Википедия

Радиальная глия — … Википедия

Список паразитов человека — Паразиты человека это паразиты, заражению которыми подвержен человек. Общее определение слова «паразит» касается не только многоклеточных и простейших, живущих за счёт своего хозяина и во вред последнему, но также вирусов, бактерий и грибов … Википедия

ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА — ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА. Содержание: Методика гистологич. исследований. 242 Теоретические основы Г. т. 246 Гистохимия. 253 Краски, употребляемые в Г. т. 258 Гистологическая техник а техника изучения… … Большая медицинская энциклопедия

КРАСКИ — КРАСКИ, химич. вещества, обладающие свойством окрашивать другие предметы в свой или другой цвет непосредственно или с помощью другого хим. соединения протравы. Широкое применение К., надо полагать, вызывается инстинктивным стремле нием человека к … Большая медицинская энциклопедия

Источник

Окраска гематоксилином и эозином

Окраска гематоксилином и эозином (окраска гематоксилин-эозином) — один из самых распространённых методов окраски в гистологии. Широко используется в медицинской диагностике, в частности в онкологии для окраски ткани, полученной при биопсии.

Техника окраски гематоксилин-эозином

Некоторые структуры плохо прокрашиваются гематоксилином и эозином (как правило гидрофобные) и требуют иных методов окраски. Например, участки клеток, богатые липидами и миелином, остаются неокрашенными: адипоциты, миелиновая оболочка аксонов нейронов, мембрана аппарата Гольджи и др.

См. также

Ссылки

Полезное

Смотреть что такое «Окраска гематоксилином и эозином» в других словарях:

Окраска гематоксилин—эозин — Гистологический образец лёгочной ткани человека, окрашенный гематоксилин эозином. Окраска гематоксилин эозин (окраска гематоксилином и эозином) является одним из самых распространённых методов гистологии. Широко используется в медицинской… … Википедия

Туберкулёз о́рганов дыха́ния — Туберкулез органов дыхания. Органы дыхания при туберкулезе (Туберкулёз органов дыхания) поражаются наиболее часто. В соответствии с принятой в нашей стране клинической классификацией туберкулеза различают следующие формы Т. о. д.: первичный… … Медицинская энциклопедия

Сердце — I Сердце Сердце (лат. соr, греч. cardia) полый фиброзно мышечный орган, который, функционируя как насос, обеспечивает движение крови а системе кровообращения. Анатомия Сердце находится в переднем средостении (Средостение) в Перикарде между… … Медицинская энциклопедия

Лейко́зы — (leucoscs; греч. leukos белый + ōsis; синоним лейкемия) заболевания опухолевой природы, протекающие с вытеснением нормальных ростков кроветворения: опухоль возникает из кроветворных клеток костного мозга. Заболеваемость Л. неодинакова в различных … Медицинская энциклопедия

Пневмония — I Пневмония (pneumonia; греч. pneumon легкое) инфекционное воспаление легочной ткани, поражающее все структуры легких с обязательным вовлечением альвеол. Неинфекционные воспалительные процессы в легочной ткани, возникающие под влиянием вредных… … Медицинская энциклопедия

Туберкулёз внелёгочный — Туберкулез внелегочный условное понятие, объединяющее формы туберкулеза любой локализации, кроме легких и других органов дыхания. В соответствии с клинической классификацией туберкулеза (Туберкулёз), принятой в нашей стране, к Т. в. относят… … Медицинская энциклопедия

Плацента — I Плацента (лат. placenta лепешка; синоним детское место) развивающийся в полости матки во время беременности орган, осуществляющий связь между организмом матери и плодом. В плаценте происходят сложные биологические процессы, обеспечивающие… … Медицинская энциклопедия

Забрюшинное пространство — I Забрюшинное пространство (spatium retroperitoneale; синоним ретроперитонеальное пространство) клетчаточное пространство, расположенное между задней частью париетальной брюшины и внутрибрюшной фасцией; простирается от диафрагмы до малого таза. В … Медицинская энциклопедия

Матка — I Матка Матка (uterus, metra) непарный мышечный полый орган, в котором происходят имплантация и развитие зародыша; расположен в полости малого таза женщины. Органогенез Развитие М. во внутриутробном периоде начинается при длине плода около 65 мм … Медицинская энциклопедия

Мокрота — I Мокрота (sputum) выделяемый при отхаркивании патологически измененный трахеобронхиальный секрет с примесью слюны и секрета слизистой оболочки носа и придаточных (околоносовых) пазух. В норме трахеобронхиальный секрет состоит из слизи,… … Медицинская энциклопедия

Источник

Окраска гематоксилином и эозином

Связанные понятия

Поликетидсинтазы (ПКС, англ. Polyketide synthase, КФ 6.4) — ферменты или мультиферментные комплексы, синтезирующие поликетиды (вторичные метаболиты, такие как антибиотики, токсины или статины). Поликетидсинтазы обнаружены у бактерий, грибов, животных и растений и имеют большое сходство с синтазами жирных кислот в организации и механизме биосинтеза. Как правило, гены синтазы определённого поликетида входят в один оперон (у бактерий) или в один кластер (у эукариот).

Эстрогеновые рецепторы (ЭР) представляют собой группу белков, находящихся внутри клеток. Они являются рецепторами, которые активируются эстрогенами (например, 17β-эстрадиолом). Существуют два класса эстрогеновых рецепторов: ядерные рецепторы эстрогена (ЭРα и ЭРβ), которые являются членами семейства ядерных рецепторов внутриклеточных рецепторов, и мембранные рецепторы эстрогена (мЭРs) (ГПЭР (ГПР30), ЭР-X и Гк-мЭР), которые в основном являются Г-белковыми рецепторами.

660нм), другая — дальний красный (λ

730нм). Поглотив свет, фитохром переходит из одной формы в другую. Этот пигмент играет важную роль в ряде процессов, таких как цветение и прорастание семян.

Не следует путать с гликанами.Глюкан представляет собой молекулу полисахарида из мономеров D-глюкозы (в отличие от гликанов, где мономером может являться не только D-глюкоза), связанных гликозидными связями.

Обоня́тельные реце́пторы — рецепторы, существующие в клеточных мембранах обонятельных нейронов и отвечающие за обнаружение молекул запаха.

Источник

Окраска гематоксилин-эозин

Окраска ГЭ — это обязательный этап для любого гистологического исследования. По препаратам, окрашенным этим методом, можно поставить большинство гистологических диагнозов, увидеть основные структуры и составляющие исследуемого объекта.

Прежде чем окрасить препарат, нужно сначала высушить его и обезводить.

Высушивание стекла с парафиновым срезом

— выловить срез на стекло и оставить при комнатной температуре до утра

— вертикально высушить срез на стекле в термостате 60оС в
течение 1 часа

— поместить для сушки в нагревательный отсек стейнера

— поместить срез в водяную баню, выловить на стекло и
подогреть над пламенем спиртовки (или феном)

— горизонтально подогреть на нагревательном столике.

После того, как срез высушен, можно приступить к окраске.

Общие этапы для удаления парафина перед окраской. Депарафинирование

Депарафинирование должно осуществляться при температуре не ниже 20оС, иначе парафин очень плохо удаляется из срезов и блокирует участки, подлежащие окрашиванию.

Окраска

Гематоксилин

Бывает 2 типов: прогрессивный, который не требует последующего
извлечения избытка красителя, и регрессивный, который красит избытком красителся с последующей его отмывкой.

Прогрессивный окрашивает от 3 и до 20 минут (в зависимости
от длительности использования и чистоты красителя).
Регрессивный до 10 сек и до 5 минут (можно дольше).

После каждого красителя применяют проточную воду 1-5-10
минут (выполняет роль подсинивающего буфера).
После регрессивного гематоксилина ставится проточная вода на 1 мин,
далее — дифференцирующие растворы (солянокислый спирт
0.25-1% на 70-96% этаноле или 0.25-0.5% водная соляная
кислота). Количество погружений стекол в раствор
устанавливается опытным путем с последующим контролем
под микроскопом. После — промывка в 2 сменах проточной
воды по 1 минуте в каждой, затем третья смена проточной
воды от 3 мин и более, до того, как все ядра клеток станут
синими.

Необходимо фильтровать любой гематоксилин после работы и доливать до уровня свежим.

Подсинивание можно выполнять с помощью подсинивающих
растворов.

— промывочный буфер для ИГХ (PBST или TBST)

— мраморная крошка в проточной воде.

Менее эффективные подсинивающие агенты — раствор аммиака или пары аммиака. При обработке этими реактивами срезы могут слезть со стёкол.

Далее стекла помещают в дистиллированную или
деоинзированную воду. Лучше сделать 2 смены по 2 минуты, чтобы
удалить остатки подсинивающих буферов — они извлекают
окраску эозином.

Окраска эозином возможна красителями, содержащими разный
процент эозина на основе спирта, воды или вода+спирт (оптимальный вариант).

Время окраски эозином от 10 сек до 3 мин. После стекла переносят в
дистиллированную воду для отмывки избытка эозина или в спирт, если используется спиртовой раствор красителя.

Избыток эозина можно отмыть опусканием стекла последовательно в
спирт-воду-спирт до тех пор, пока не будет достигнут
желаемый оттенок. При этом нужно помнить, что последующими
спиртами может быть извлечено еще какое-то количество
эозина. Длительность этапов отмывки определяется экспериментально и контролируется визуально под микроскопом.

Эозин, как и гематоксилин, необходимо ежедневно фильтровать, доливая до уровня свежим раствором.

Обезвоживание. После эозина идут 3-4 смены этанола или изопропанола по 2 мин каждая. Первая смена выливается через 60-8-100 стекол, или при помутнении. Остальные переставляются на одну позицию влево, так, чтобы последняя получилась свежая.

Просветление. Происходит посредством 2 смен ксилола по 1 минуте.
Карбол-ксилол совершенно лишний в этом процессе при
условии своевременной замены реактивов.

Протоколы окраски ГЭ

Ручной протокол

Ксилол 3 мин
Ксилол 3 мин
Ксилол 3 мин
Этанол (ИПА) 2 мин
Этанол (ИПА) 2 мин
Этанол (ИПА) 2 мин

Дистиллированная вода 2 мин

Гематоксилин 3-20 мин (в зависимости от типа)

Проточная вода 2 мин

Дифференцирующий раствор 10 сек — 1 мин (для регрессивного; время зависит от типа раствора)

Проточная вода 3-5 мин или
подсинивающий раствор
(можно дольше — до синих ядер)

Дистиллированная вода 2 смены по 2 мин

Эозин 10 сек — 3мин

Дистиллированная вода 1 минута или дольше

Этанол (ИПА) 3 мин
Этанол (ИПА) 3 мин
Этанол (ИПА) 3 мин
Этанол (ИПА) 3 мин
Ксилол 1 минута
Ксилол 1 минута (или дольше, если необходимо).

Общее время процесса: 44 мин — 60 мин.

Для окраски в стейнерах протокол может быть похожим, но не каждый стейнер имеет столько станций для реагентов. Иногда полностью соблюсти вышеописанный протокол не представляется возможным, поэтому приходится жертвовать этапами с дистиллированной водой и дифференцировкой, а также сокращать этапы с этанолом и ксилолом. В этом случае необходимо чаще менять ксилолы и спирты, а также красители, т.к. увеличивается их расход, что, кстати, влияет на себестоимость исследования.

Очень желательно на рабочем месте для окраски иметь работоспособный микроскоп с малым увеличением (10х).

Контролируйте вашу окраску перед подачей стекол патологам!

Источник

Окрашивание срезов в гистологии для обзорных целей


	Микроскопическая техника Гистологическая техника Гематоксилин Обзорные окрашивания Методы окраски тканей Окрашивание нервной ткани Окрашивание костной ткани Кровь: методы окраски Окрашивание азаном по методу Гейденгайна Микротом для парафиновых срезов МПС-2

Окрашивание срезов в гистологии для обзорных целей

Различают методы окраски для обзорных целей, применяемые для получения общего представления о морфологии ткани или органа, и специальные, предназначенные для выявления определенных элементов клетки или ткани (например, комплекса Гольджи, митохондрий, эластических волокон соединительной ткани и т. д.).

Ниже рассматриваются лишь некоторые методы окрашивания для обзорных целей.

Суть их обычно заключается в том, что при этом окрашиваются ядра и каким-то контрастным красителем— цитоплазма.

Ядерные (основные) красители. для окрашивания ядер используются гематоксилин, кармин, сафранин и другие основные красители. Существует несколько способов приготовления растворов гематоксилина.

Наиболее распространенным является гематоксилин Эрлиха.

Железный гематоксилин Гейденгайна

окрашивает в черный цвет не только ядра, но и митохондрии, темные диски скелетной и сердечной мышечной ткани и другие структуры. для его приготовления 1 г гематоксилина растворяют в 10 мл 96% спирта, добавляют 90 мл дистиллированной воды и оставляют созревать на срок не менее 4 нед. Перед окрашиванием срезы протравливают в течение 2—12 ч в 2,5% растворе железоаммиачных квасцов. Раствор квасцов получают за счет 4-кратного разведения исходного 10% раствора, для приготовления которого используются кристаллы квасцов только фиолетового цвета. После промывания в дистиллированной воде срезы окрашивают в течение 1—36 ч раствором гематоксилина, разведенным вдвое по сравнению с исходным. В зависимости от исследуемого материала можно использовать и большие разведения красителя. Окрашенный срез ополаскивают дистиллированной водой и дифференцируют под контролем микроскопа в растворе железоаммиачных квасцов. После этого срезы промывают в водопроводной воде не менее 30 мин при частой смене воды.

Железный гематоксилин Вейгерта

Сафранин является прекрасным ядерным красителем, особенно для материала, фиксированного в растворах, содержащих осмий или хром. 10 г чистого сафранина или сафранина «С-ехtrа» (качество красителя имеет очень большое значение) растворяют в смеси 155 мл 96% спирта со 145 мл дистиллированной воды. Из полученного таким образом основного раствора перед употреблением берут 20 мл и добавляют 80 мл 50% спирта. Время окрашивания 24 ч. После ополаскивания в дистиллированной воде срезы дифференцируют, контролируя под микроскопом в 0,1% растворе хлористоводородной кислоты в абсолютном спирте. Затем следует промывка абсолютным спиртом, просветление в ксилоле, заключение в бальзам.

Эти красители не являются избирательно цитоплазматическими. Красители для цитоплазмы подбирают таким образом, чтобы их цвет хорошо контрастировал с окраской ядер. Для до окрашивания цитоплазмы после окраски ядер гематоксилином чаще всего используется 1% водный раствор эозина. Для срезов, окрашенных кармином, используют раствор пикриновой кислоты, полученный путем разведения водой насыщенного раствора пикриновой кислоты в отношении 1:3 (при комнатной температуре в 100 мл воды растворяется примерно 1,2 г пикриновой кислоты, следовательно, для получения насыщенного раствора следует взять чуть больше этого количества пикриновой кислоты). Время окрашивания 2—5 мин. Цитоплазма клеток и эритроцитьи красятся в желтый цвет.

Эта методика наиболее часто применяется и поэтому должна быть описана более детально. Этим методом можно окрашивать целлоидиновые срезы, депарафинированные, парафиновые или замороженные срезы. Замороженньие срезы перед окрашиванием следует обезжирить, поместив их на 20-3О мин или на ночь в 96% спирт. Далее срезы переносят в дистиллированную воду. Целлоидиновые срезы переносят из одного бюкса в другой с помощью препаровальной иглы с загнутым концом. Депарафинированные и замороженные срезы можно окрашивать на предметном стекле, наливая или сливая соответствующие растворы. Растворы красителей при этом можно сливать обратно для повторного использования.

Порядок окрашивания срезов гематоксилин-эозином следующий:

1) срезы переносят в дистиллированную воду;

2) окрашивают гематоксилином Эрлиха 2-5 мин;

3) промывают в дистиллированной воде;

4) затем промывают в водопроводной воде 3-5 мин;

5) осуществляют контроль под микроскопом;

6) дифференцируют 1% раствором хлористоводородной кислоты в 70° спирте 1—2 с;

7) быстро переносят срезы в водопроводную воду на 30 мин при частой смене; в водопроводной воде вишневая окраска ядер сменяется синей;

8) осуществляют контроль под микроскопом; если хроматин и ядрышко видны недостаточно четко, то дифференцировку следует повторить (срезы можно смотреть под большим увеличением, накрыв их покровным стеклом);

9) промывают в дистиллированной воде;

10) 1% водный раствор эозина 0,5-1 мин;

11) промывают в дистиллированной воде (и дифференцируют, так как вода смывает эозин); время промывки контролируют по цвету среза;

12) проводят обезвоживание, осветляют в ксилоле, заключают в бальзам. В спиртах эозин также отмывается, так что проводить срезы по спиртам следует быстро. Время окрашивания в гематоксилине нужно установить на первых 2-3срезах и затем все срезы данного блока окрашивать одинаково. Дифференцировку в растворе хлористоводородной кислоты в спирте можно не проводить, но в этом случае структуры ядра будут менее четкими и в цитоплазме может быть синеватый фон.

Методика окрашивания азур-2-эозином.

Эта методика также вполне пригодна для обзорных целей. Прогрессивный метод окрашивания азур-2-эозином довольно ненадежен, но регрессивный дает стабильные результаты. Основными растворами являются 0,1% водный раствор азура и 0,1% водный раствор эозина. Для приготовления рабочего раствора на 100 мл дистиллированной воды добавляют 100 капель основного раствора азура и 110-120 капель раствора эозина. Срезы помещают в раствор красителя на 12-24 ч. Затем срезы дифференцируют. Методы дифференцировки могут быть разными в зависимости от того, насколько интенсивно окрасились срезы. Дифференцировку можно проводить в подкисленной дистиллированной воде, затем промывать в чистой дистиллированной воде, обезвоживать в спиртах, просветлять в ксилоле и заключать в бальзам. При этом следует учесть, что в спиртах дифференцировка продолжается. Можно дифференцировать срезы прямо в 96% спирте. Ход дифференцировки контролируют под микроскопом. Окрасив несколько срезов, можно контролировать на глаз по цвету среза, время, от времени выборочно проверяя качество окраски под микроскопом.

Ниже описаны методики, и прописи красителей в частности гематоксилина и его приготовление для окраски срезов из книги Р. Лилли

ПАТОГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ГИСТОХИМИЯ

ПРОТРАВНОЕ ОКРАШИВАНИЕ ЯДЕР И ДРУГИХ СТРУКТУР

Избирательность окраски ядер квасцовым гематоксилином возрастает в присутствии избытка солей алюминия или еще лучше в кислых растворах. Многие авторы предпочитают перекрашивать срезы не подкисленными растворами красителя, а затем дифференцировать их в кислоте, подкисленном спирте или других дифференцирующих агентах.

Квасцовый гематоксилин, приготовленный на 10%-ном водном растворе алюмо-аммониевых квасцов, имеет рН около 2,95; при добавлении 2% уксусной кислоты рН сдвигается до 2,34, при добавлении 4% — до 2,22.

Отмечено, что содержание гематеина в различных партиях поступающего в продажу гематоксилина различно, так что краситель иногда может представлять собой почти чистый гематеин. У меня имелись образцы гематоксилина, которые «вызревали» «естественным путем» за сравнительно короткий срок (8—10 дней). Обычный срок вызревания составляет 8—10 недель, хотя, по данным Шморля, период вызревания для гематоксилина Бемера составляет 8—10 дней. Иногда встречаются партии гематоксилина, которые оказываются сильно «переокисленным» при добавлении стандартных количеств иодата натрия. Я могу привести пример, когда 1 г NaIО3 окисляли 6 г гематоксилина. Это соотношение ниже, чем в прописи Майера, но выше рекомендованного.

Хорошо «вызревшие» растворы квасцового гематоксилина разбавляют дистиллированной водой до концентрации приблизительно 10 мг гематоксилина в 1 л. При «переокислении»- независимо от того, достигнуто ли оно за счет длительного выдерживания на воздухе или избыточной дозы окислителя,— раствор меняет цвет от пурпурного через красный до оранжевого или даже желто-коричневого.

Для приготовления растворов гематоксилина с хорошими красящими свойствами на 1 г гематоксилина обычно берут 177 мг перманганата калия, 200 мг иодата натрия и 500 мг окиси ртути, но, как было показано недавно, количества некоторых из зтих окислителей можно уменьшить.

переокисленвые растворы гематоксилина при добавлении 30% глицерина восстанавливали при стоянии свою способность к окрашиванию.

В табл. 1 приведен ряд наиболее часто употребляемых прописей приготовления

квасцовых гематоксилинов из расчета на 1 л раствора. В некоторых методах рекомендуется сначала растворить гематоксилин в спирте или в воде и окислить либо на воздухе, либо добавляя окислители. По-видимому, не имеет значения, добавляются ли квасцы, глицерин, вода, уксусная кислота и другие компоненты к гематоксилину до или после его окисления; не важен и метод окисления. Спирт и глицерин могут сами окисляться химическими окислителями.

Пропись Делафильда цитируется по Майеру («Энциклопедия» Эрлиха).

Я беру 60 г квасцов, что несколько превышает количество, необходимое для получения раствора 1 : 11, который Майер считает насыщенным. Маллори советует применять 15%-ный раствор квасцов и во всех прописях использует этиловый спирт. Последняя рекомендация кажется полезной.

Прописи для приготовления 1 л квасцовых гематоксилинов

Источник

визитки установка дверей шаблоны →

Что и для чего?

Что окрашивает эозин в клетке

Окраска гематоксилин—эозин

Смотреть что такое «Окраска гематоксилин—эозин» в других словарях:

Окраска гематоксилином и эозином

Техника окраски гематоксилин-эозином

См. также