Что называют цоликлонами и для чего их используют

Что называют цоликлонами и для чего их используют

Цоликлоны анти-А и анти-В предназначены для определения групп крови человека системы АВО взамен стандартных изогем-агглютинирующих сывороток.

Определение групп крови системы АВО включает выявление антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами и выявление агглютининов в сыворотке или плазме исследуемой крови стандартными эритроцитами. Антигены А и В определяют с помощью цоликлонов анти-А и анти-В. У доноров обязательно определение не только антигенов в эритроцитах, но и агглютининов в сыворотке (плазме) с помощью стандартных эритроцитов.

Основные свойства цоликлональных сывороток.

Цоликлоны анти-А и анти-В являются продуктом гибридомных клеточных линий, полученных в результате слияния мышиных антителообразующих В-лимфоцитов с клетками мышиной миеломы. Индивидуальные гибридомные линии продуцируют гомогенные антитела только одного класса иммуноглобулинов, которые полностью идентичны по структуре и биологической активности. Антитела, продуцируемые клетками одного клона (потомство одной клетки), являются моноклональными.

Справка. Клональные антитела.

Культура клеток одной специфичности, происходящих из одного лимфоцита, образует клетки одного клона. Главное заключается в следующем: необходимо получить от одной клетки специфические антитела и наработать их в неограниченном количестве. Трудность заключается в преодолении двух задач: во-первых, нормальные клетки после нескольких делений погибают; во-вторых, только раковые клетки способны неограниченно размножаться. Для решения этих двух несовместимых проблем в 1975 году Г. Кёлер и К. Мильштейн создали клеточные гибриды, или гибридомы. Гибридомы — это слияние нормальных лимфоцитов в питательной среде с клетками миеломы. Лимфоциты в этой среде не погибают, а от миеломного партнера получают возможность бесконечно размножаться. Таким образом, гибридомный клан размножается, а в результате этого процесса образуются моноклональные антитела.
Лимфоциты, несущие агтлютиноген А, вырабатывают специфическое антитело анти-А; лимфоциты, несущие агтлютиноген В, вырабатывают специфическое антитело анти-В.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются двумя различными гибридомами. Цоликлоны анти-А и анти-В представляют собой разведенную асцитную жидкость мышей-носителей соответствующей гибридомы, в которой содержатся специфические иммуноглобулины класса М (IgM), направленные против группоспецифических антигенов А или В человека.
Таким образом, цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов.

Авидность, то есть время наступления реакции агглютинации и ее выраженность, у цоликлонов анти-А и анти-В выше, чем у изогемагглютинирующих АВО-сывороток, особенно в случае слабо выраженных антигенов эритроцитов.
Цоликлоны не являются клетками человеческих тканей, что исключает возможность инфекционного заражения.

Методика определения групп крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В

Определение групп крови системы АВО реагентами цоликлон производится в нативной крови, стабилизированной с помощью применяемых консервантов (глюгицир, цитроглюкофосфат, гепарин и др.); в крови, взятой из пальца; в крови, взятой без консерванта. Наиболее четкая реакция агглютинации наблюдается при использовании высокой концентрации эритроцитов.

Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре от +15° до +25°С. Реагенты не должны храниться открытыми, так как при высыхании активность антител снижается. Не следует пользоваться реагентами, если в них имеются нерастворимые хлопья или помутнение. Для каждого реагента используют свою маркированную (анти-А или анти-В) пипетку. Определение группы крови системы АВО производится обычными методами на белой фарфоровой или любой другой планшетке со смачиваемой поверхностью.

Высокая активность и авидность реагентов цоликлон позволяет применять по одной серии реагентов анти-А и анти-В. На плоскость планшета или тарелку наносят цоликлоны анти-А и анти-В по две капли (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше (0,01 мл). В случае определения группы крови, взятой из пальца или взятой без консерванта, необходимо брать большое количество эритроцитов, т. е. первые капли из пальца (без сильного выдавливания) или свободные эритроциты из осадка свернувшейся крови.

При определении группы крови антитела и кровь смешивают стеклянной палочкой или углом предметного стекла, которые промывают и досуха вытирают перед размешиванием каждой капли. Наблюдение за реакцией проводят при легком покачивании в течение не более 2,5 минуты. Положительный результат при определении группы крови проявляет себя агглютинацией (склеиванием) эритроцитов. При этом агглютинаты можно увидеть без каких-либо приспособлений в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся и образующих крупные хлопья.
При отрицательной реакции определения группы крови капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агтлютинаты в ней не обнаруживаются. Агглютинация, обычно, определяется в течении первых 3—5 секунд. Несмотря на это, наблюдение за результатами необходимо вести не меньше 2,5 минуты из-за возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Источник

Цоликлон

Цоликло́н — это солевой раствор моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов человека. Моноклональные антитела для цоликлонов получают при помощи гибридов, или определенных штаммов бактерий. Бактерии для таких производств получают методами генной инженерии.

Название препаратов происходит от названия института, где изобрели и изготовили эти растворы — Центральный Ордена Ленина Институт переливания крови в Москве, сейчас — Гематологический научный центр Росздрава.

Содержание

Характеристика и основные свойства Цоликлонов Анти-А, Анти-В и Анти-АВ

Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М, Цоликпоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом, Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.

Техника определения групп крови человека системы АВО с помощью цоликлонов

Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на плоскости: на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С. 1. Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ по одной большой капле (0.1 мл) под соответствующими надписями. 2. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03 мл). 3. Смешайте кровь с реагентом, 4. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. 5. Результат реакции а каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся В крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной а красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. 6. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице:

Цоликлоны на практике применяются для определения групп крови. В настоящее время существует большое количество цоликлонов к разным антигенам, которые предназначены для определения групп крови по различным системам. Наиболее часто используются цоликлоны анти-А (красная жидкость), анти-B (синяя жидкость) и анти-D (прозрачная жидкость). Первые два цоликлона предназначены для определения группы крови по системе AB0, последний — для определения группы крови по системе резус. Кроме того, достаточно распространены в использовании цоликлон анти-А1 (лектин), позволяющий среди носителей А-антигена выбрать популяцию носителей ослабленного А2-антигена (то есть лиц, имеющих А2(II) или А2В(IV) группы крови). Неиспользовние цоликлона анти-А1 чревато неверным результатом для такой категории лиц. (вероятна постановка 0(I) вместо А2(II) и В(III) вместо А2В(IV) групп крови). Цоликлон анти-D имеет 2 модификации: собственно анти-D, используемый во врачебно-диагностической практике в комплексе с 10%-м желатином, и анти-D-супер, позволяющим произвести экспресс-определение резус-фактора (при этом все резус-отрицательные пробы требуют обязательной проверки цоликлоном анти-D, так как возможен вариант носительства ослабленного антигена системы резус.).

Форма выпуска

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме в пластиковых флаконах объёмом 10 мл с капельницей или в стеклянных флаконах объёмом 5 мл. Цоликлон Анти-А — красного цвета, Анти-В — синего и Анти-АВ — бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1 %.

Хранение

Срок хранения — 2 года при температуре 2-8°С. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2-8°С в течение месяца в закрытом виде.

Источник

Определение группы крови цоликлонами

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела. Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Для чего проводится анализ?

Группа и резус-фактор – генетически обусловленные характеристики крови, которые наследуются от родителей и остаются неизменными на протяжении всей жизни человека. Классификация групп крови осуществляется, исходя из определенного набора биохимических параметров и состава антигенов, и насчитывает 4 основных группы. Переливание пациенту крови несовместимой группы или с другим резус-фактором несет с собой смертельную опасность – иммунная система начинает вырабатывать антитела против чужеродных клеток, которые атакуют и разрушают их. Именно по этой причине в ситуациях, которые несут с собой риск обширной кровопотери, необходимо точное определение принадлежности крови и резус-фактора как у донора, так и у реципиента.

Что такое цоликлоны?

Цоликлон — это солевой раствор моноклональных антигенам к антител эритроцитов человека. Моноклональные антитела для употребляют определения группы крови. Для их используют получения гибридомную технологию. Цоликлоны анти-А и созданы-В анти для определения групп крови системы человека АВО взамен стандартных изогем-сывороток агглютинирующих.

Цоликлоны анти-А и анти-В являются гибридомных продуктом клеточных линий, приобретенных в итоге мышиных слияния антителообразующих В-лимфоцитов с клеточками мышиной опухоль (миеломы костного мозга). Личные гибридомные продуцируют полосы гомогенные антитела только 1-го класса которые, иммуноглобулинов целиком схожи по структуре и био Антитела. активности, продуцируемые клеточками 1-го клона (потомство клеточки одной), являются моноклональными.

В антителах клеток одной специфики, происходящих из 1-го образует, лимфоцита клеточки 1-го клона. Главное заключается в нужно: последующем получить от одной клеточки специальные наработать и антитела их в огромном количестве. Трудность заключается в задач 2-ух преодолении: во-1-х, обычные клеточки после нескольких гибнут делений; во-2-х, только раковые клеточки способны плодиться неограниченно. Для решения этих 2-ух несопоставимых 1975 в заморочек году Г. Кёлер и К. Мильштейн сделали модификации клеточные, либо гибридомы. Гибридомы — это обычных слияние лимфоцитов в питательной среде с клеточками Лимфоциты. миеломы в этой среде не гибнут, а от миеломного получают напарника возможность нескончаемо плодиться. Подобным гибридомный, образом клан плодится, а в итоге этого образуются процесса моноклональные антитела.

Как проводится исследование?

Для определения группы крови с использованием цоликлонов необходима плоская ровная поверхность (планшетка), смоченная водой, набор химических реагентов и пробы биологической жидкости, причем специалист может использовать любую кровь: капиллярную, венозную, замороженную и т. д.

Спустя несколько минут наступит реакция, по которой можно с высокой точностью определить принадлежность крови к определенной группе.

Расшифровка результатов

Определение группы эритроцитарных антигенов и резус-фактора давно стало одним из обязательных исследований для большинства пациентов, поступающих на стационарное лечение. Его проведение возможно на любом уровне оказания медицинской помощи при условии наличия необходимых реагентов и инструментов.

Обычно, определение группы проводится с помощью стандартных сывороток, хотя, конкуренцию ему составляет еще один метод, сходный по методике проведения с эталонным использование цоликлонов.

Цоликлон моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Таблица. Реакции разных групп крови с цоликлоном анти-А и анти-В.

Что следует учитывать при проведении анализа?

Чтобы результат анализа был максимально достоверным, при проведении процедуры необходимо соблюдать ряд условий:

Продолжительность реакции должна составлять не менее 3 минут, а при сомнительном результате время наблюдения за образцами биоматериала следует продлить до 5 минут. Однако по истечении 10 минут может произойти подсыхание биоматериала и естественное выпадение эритроцитов в осадок, поэтому доверять такому исследованию не стоит.

Для чего необходим анализ?

В настоящее время цоликлоны используются преимущественно для определения группы крови и резус-фактора. Исследование может проводиться как планово, по назначению участкового врача-терапевта, так и по экстренным показаниям, когда требуется переливание крови (в ходе операции произошла массивная кровопотеря или пациент был доставлен с обширной травмой и массивным кровотечением). В поликлинике определение группы проводится преимущественно за счет использования сывороток.

Группа крови по цоликлонам определяется чаще всего в стационаре или специализированных лабораториях. К использованию цоликлонов прибегают, обычно, при невозможности использования сывороток. Скорость получения результатов несколько быстрее, чем при исследовании стандартными сыворотками, что делает методику более универсальной. Многие лаборатории стремятся перейти на использование данного метода.

Видео — Определения групп крови с помощью цоликлонов

Источник

Как определить группы крови с помощью цоликлонов? Насколько точен результат?

Определение группы крови — важное лабораторное исследование, которое показано людям перед любыми операциями, а также беременным, военным, водителям транспортных средств и другим группам лиц, которым в любое время может потребоваться переливание крови.

Существует много техник проведения этого анализа, но самым быстрым и простым способом считается определение группы крови с помощью цоликлонов.

Принцип действия цоликлонов

Цоликлоны — специальные реагенты для определения группы крови, которые были разработаны в Центральном Ордена Ленина Институте Переливания Крови в Москве (ЦОЛИПК), откуда и получили свое название. Их изобретение позволило отказаться от более сложного и времязатратного метода стандартных сывороток.

Для того, чтобы понять, как работают цоликлоны, необходимо знать, чем группы крови отличаются друг от друга. В основе их различия лежит наличие или отсутствие на поверхности эритроцитов особых веществ, называемых агглютиногенами.

Всего существует два типа агглютиногенов, которые обозначаются буквами A и B.

У людей с первой группой крови агглютиногенов нет вообще, поэтому ее обозначают цифрой 0. Вторая группа крови подразумевает наличие агглютиногена A и обозначается соответствующей буквой.

Подобным же образом присутствие агглютиногена B относит кровь к третьей (B) группе. Ну а если в крови человека содержатся сразу оба агглютиногена, то ее обозначают буквами AB и называют четвертой.

Именно на основе этой несложной схемы разработан принцип действия цоликлонов.

Цоликлоны — это жидкости, содержащие вещества, которые способны вступать в реакцию с тем или иным агглютиногеном и вызывать при этом свертывание исследуемой крови. Цоликлон, показывающий таким образом наличие агглютиногена A, называется Анти-A и имеет красный цвет.

Вторая жидкость, способная сворачивать кровь с агглютиногеном B, является цоликлоном Анти-B и имеет синюю окраску. Существует также бесцветный цоликлон Анти-AB, представляющий собой смесь Анти-A и Анти-B цоликлонов и необходимый в некоторых случаях для подтверждения полученного результата. Жидкости выпускаются в стеклянных флаконах либо в пластиковых с капельницей, что облегчает их использование.

Алгоритм действий при анализе

Для проведения анализа на группу крови с помощью цоликлонов понадобится только планшет (любая чистая плоская пластина достаточного размера, например, тарелка), цоликлоны и две капли крови.

Для проведения исследования подходит почти любая кровь: взятая в консервант или без консерванта, из вены или из пальца.

Прежде чем начать работу, нужно пометить на планшете, с какой стороны какой цоликлон будет нанесен, иначе есть риск спутать их результаты.

Затем необходимо нанести по одной большой капле каждого цоликлона (Анти-A обычно капают с левой стороны, а Анти-B — с правой). Далее к каждой капле добавляют по одной небольшой капле крови. Капля крови должна быть примерно в 10 раз меньше по размеру, чем капля цоликлона. После этого планшет нужно аккуратно покачать, чтобы жидкость и кровь перемешались, но так, чтобы разноименные цоликлоны не смешались между собой.

При наблюдении за результатом анализа в течение нескольких минут можно увидеть либо равномерное перемешивание крови и цоликлона, либо реакцию агглютинации, то есть склеивания эритроцитов и свертывания крови. В этом случае становится видно, как эритроциты сначала соединяются в мелкие комочки, а затем выпадают хлопьями. Остается только интерпретировать полученные результаты.

Однако в этом случае следует подтвердить полученный результат двумя дополнительными пробами. Для начала каплю исследуемой крови смешивают с цоликлоном Анти-AB, произошедшая при этом реакция агглютинации подтвердит наличие агглютиногенов A и B в исследуемой крови.

Также следует исключить неспецифическое склеивание эритроцитов, которое проявляется в агглютинации кровяных телец в любом растворе и возникает при некоторых тяжелых заболеваниях. Для этого каплю крови смешивают с обычным физиологическим раствором натрия хлорида, отсутствие реакции подтвердит четвертую (AB) группу крови.

Важные моменты

Метод определения группы крови с помощью цоликлонов является достаточно точным. Неверные результаты анализа чаще всего бывают вызваны ошибками, допущенными при его проведении. Для того, чтобы избежать их, необходимо учитывать несколько важных моментов.

Продолжив наблюдение, вы можете, к своему удивлению, заметить замедленную реакцию и со вторым цоликлоном, если у исследуемой крови есть свои особенности. Однако по прошествии слишком большого времени может произойти подсыхание крови и естественное оседание эритроцитов, поэтому таким результатам доверять не стоит.

Планшет необходимо покачивать в течение всего периода наблюдения, в противном случае эритроциты могут оседать по краям капли, что ошибочно принимается за их агглютинацию.

Напротив, при лейкозах происходит снижение агглютиногенных свойств эритроцитов, и они могут не вступать в реакцию даже при применении реагентов высокой активности, такое наблюдается также у новорожденных детей. У некоторых групп лиц, таких как близнецы и пациенты, перенесшие пересадку костного мозга или многочисленные переливания некорректно подобранной крови, возникает редкое явление, называемое кровяной химерой.

Это означает, что в их организме сосуществуют эритроциты, относящиеся к разным группам крови. Исследование крови таких людей представляет немалую сложность. Поэтому в случае неясного результата анализа кровь лучше подвергнуть более точному исследованию в условиях лаборатории.

Определение группы крови — важнейшее исследование, где от точности полученного результата зависит жизнь пациента. При переливании неправильно подобранной крови развиваются тяжелые осложнения от лихорадки до повреждения легких и летального исхода, ведь реакция агглютинации, наблюдаемая нами на планшете, произойдет непосредственно в организме реципиента.

Поэтому результаты экспресс-исследования с помощью цоликлонов, которое может быть произведено непосредственно при заборе крови в процедурном кабинете, требуют подтверждения лабораторными методами в специализированной лаборатории.

Сегодня определение группы крови цоликлонами становится все более частым благодаря простоте и точности методики при правильном соблюдении алгоритма исследования. Если раньше такой анализ был доступен лишь в профильном стационаре, то теперь многие лаборатории отказываются от других, более сложных методов, в пользу цоликлонов.

При желании узнать свою группу крови вы можете сделать это в поликлинике по месту жительства с соответствующим направлением от терапевта либо в частном медицинском центре. Владея минимальными медицинскими навыками и имея в своем распоряжении цоликлоны, вы можете провести такое исследование и в домашних условиях, но в этом случае нужно особо строго отнестись к соблюдению правил асептики и антисептики.

Источник