Что называют специфичностью серологических реакций

ВИДЫ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

ФАЗЫ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

1. Специфическая— образование комплекса антигена и соответствующего ему антитела. Видимого изменения в этой фазе не происходит, но образовавшийся комплекс становится чувствительным к неспецифическим факторам, находящимся в среде (электролиты, комплемент, фагоцит);

2. Неспецифическая – в этой фазе комплекс антиген- антитело взаимодействует с неспецифическими факторами среды, в которых происходит реакция. Их взаимодействие – склеивание или растворение. В растворе образуются хлопья или помутнение.

ВИДЫ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

Реакция агглютинации— склеивание или выпадение в осадок корпускулярных антигенов: бактерий, эритроцитов, латексных частиц с адсорбированными на них антигенами под влиянием антител в среде с электролитом. При положительной реакции в лунке образуется осадок в виде зонтика или образуются хлопья в растворе.

-реакция непрямой гемоглютинации

Реакция с использованием меченных антител –метод для диагносики микробных антигенов и антител

Реакция преципитации— в реакции преципитации ( осаждения)происходит выпадение в осадок специфического иммунного комплекса, состоящего из растворимого антигена (растворимые вещества белковой или липополисахаридной природы – полные антигены и гаптены) и специфического антитела в присутствии электролита ( изотонический раствор).

Реакция с использованием меченных антител- этот метод используется для экспресс-диагностики. С его помощью можно выявлять как микробные антигены, так и антитела.

Реакция нейтрализа́ции— реакция взаимодействия кислоты и основания между собой с образованием соли и слабо диссоциирующего вещества (воды).

Реакции, протекающие с участием комплемента.Реакция основана на том, что специфический комплекс антиген-антитело всегда адсорбирует (связывает) комплемент. в результате чего происходит лизис антигена.

-стерильный— сохраняется в организме после исчезновения возбудителя. Пример – иммунитет после многих перенесенных бактериальных и вирусных инфекций: дифтерия, коклюш, натуральная оспа, ветряная оспа, корь и др.

-нестерильный– сохраняется в организме только в присутствии возбудителя. Сам возбудитель поддерживает иммунитет, при исчезновении возбудителя иммунитет быстро угасает. Нестерильный иммунитет характерен для клеточного иммунного ответа. Пример – иммунитет при туберкулезе, бруцеллезе.

Клеточный иммунитет — такой тип иммунного ответа, в котором не участвуют ни антитела, ни система комплемента.

Местный иммунитет представляет собой защитные функции организма, которые оказывают сопротивление болезнетворным вирусам и бактериям на месте их появления.

Отличие общего иммунитета от местного заключается в разной направленности действия. Общая защита организма осуществляется посредством воздействия антител в лимфатической жидкости и кровеносной системе. Локальная устойчивость представляет собой внешний барьер организма. Если внешняя иммунная защита не смогла оказать сопротивление чужеродным элементам, в действие вступают антитела общего иммунитета

Источник

Серологические реакции.

Серологические исследования —это методы изучения определенных антител или антигенов в сыворотке крови больных, основанные на реакциях иммунитета. С их помощью также выявляют антигены микробов или тканей с целью их идентификации.

Обнаружение в сыворотке крови больного антител к возбудителю инфекции или соответствующего антигена позволяет установить причину заболевания.

Серологические исследования применяют также для определения антигенов групп крови, тканевых антигенов и уровня гуморального звена иммунитета.

Как проводятся исследования:

Серологические исследования основаны на физиологичеком феномене – образовании в организме, в сыворотке крови антител в ответ на попадание в организм чужеродного белка (антигена) – микроба, вируса, измененных тканей организма

Серологические методы высокоинформативны для распознавания причин миокардитов, болезни легионеров, атипичных пневмоний, кишечных инфекций, вирусных гепатитов. Они используются также для диагностики так называемых аутоиммунных заболеваний, когда в организме человека некоторые ткани так изменяют свои свойства, что становятся для него как бы чужеродными. В ответ на это в организме образуются антитела против этих структур. Выявление такого рода антител в сыворотке крови позволяет диагностировать эти серьезные болезни.

Cерологические реакции: реакция агглютинации; реакция с участием комплемента (лизис); реакция нейтрализации; реакция преципитации; реакция с использованием меченых антител или антигенов.

Реакции агглютинации —это простые реакции склеивания корпускулярных антигенов с помощью антител.

— реакция торможения гемагглютинацииоснована на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, которые в результате теряют свойство склеивать эритроциты. Используется для диагностики вирусных болезней;

— реакция коагглютинации— разновидность реакции агглютинации, в которой антигены возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой.

Если имеется стандартные образцы антигена (возбудителя какого-либо заболевания, клеток измененной ткани), а в сыворотке крови больного обнаруживаются антитела к этому антигену, можно сделать вывод, что человек болен данной болезнью. Судят о том, есть ли антитела, по тем реакциям, в которых они участвуют с данным антигеном.

Здесь приведен пример реакции агглютинации, склеивания, появления помутнения сыворотки крови. Она наливается в ряд пробирок и разводится физиологическим раствором в разных разведениях. Затем в каждую пробирку добавляется стандарный, известный антиген, микроб или вирус. Смотрят, в каком из наибольших разведений мутнеет сыворотка – это и будет титр реакции для данного больного.

Чем титр больше, тем больше вероятность заболевания. Поэтому говорят о диагностически-значимых титрах для болезни, потому что более низкие титры могут просто говорить о случайной встрече человека с данным микробом, но без болезни. Есть еще метод исследования т.н. парных сывороток, когда кровь больного исследуется в начале заболевания и через 2 – 3 недели. Вначале антител может не быть, а в более поздних стадиях титр может повышаться. Это также свидетельствует о наличии болезни.

Реакции преципитации— реакции, в которых происходит осаждение комплекса антиген-антитело. Антиген в данном случае должен быть растворимым. Осадок комплекса антиген-антитело называется преципитатом. Реакцию ставят путем наслоения раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антиген-антитело на границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Наибольшее распространение получила реакция преципитации в полужидком геле агара (двойная иммуно-иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др.). Реакцию используют для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента.

Реакция нейтрализацииоснована на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки или ткани. При отсутствии повреждающего эффекта смеси антител и микробов или их токсинов на культуру клеток говорят о специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело.

Реакции с участием комплементаоснованы на активации комплемента в результате присоединения его к комплексу антиген-антитело. Если комплекс антиген-антитело не образуется, то комплемент присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело, вызывая тем самым гемолиз (разрушение) эритроцитов (реакция радиального гемолиза). Применяется для диагностики инфекционных болезней, в частности, сифилиса.

Реакция с использованием меченых антител или антигеновоснована на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками, меченными флюорохромами, способны светиться в ультрафиолетовых лучах люминисцентного микроскопа (реакция иммунофлюоресценции).

В иммуноферментном анализе вместо флюорохромов иммунную сыворотку можно метить ферментом (пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой). Реакцию оценивают по окрашиванию раствора в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфотаза) цвет.

Радиоиммунологический метод— количественное определение антител или антигенов, меченых радионуклидами, с применением аналогичных антигенов или антител.основана на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками, меченными флюорохромами, способны светиться в ультрафиолетовых лучах люминисцентного микроскопа (реакция иммунофлюоресценции).

Методы применяют для выявления антигенов микробов, определения гормонов, ферментов, лекарственных веществ и иммуноглобулинов.

Источник

Что называют специфичностью серологических реакций

Каждый организм представляет собой уникальную биологическую систему, наделенную гомеостазом – постоянством внутренней среды. Это постоянство контролируется иммунной системой организма, а конкретно – иммунокомпетентными клетками.

В ответ на проникновение во внутреннюю среду организма генетически чужеродных веществ (антигенов) иммунная система отвечает развитием иммунологических реакций – выработкой антител, специфических против данного антигена и ни какого другого. Иммунологические реакции направлены на удаление антигенов из организма и характеризуются высокой специфичностью. Поэтому для характеристики антигенов введено понятие «специфичность» и определяется оно наличием антигенной детерминанты, с которой связывается активный центр антитела.

Антигенную структуру микроорганизмов можно изучать в серологических реакциях с помощью антител. И это имеет, прежде всего, диагностическое значение. Серологическими реакции называют потому, что источником антител для реакции является сыворотка крови (от лат. Serum сыворотка). В настоящее время у иммунологов появились возможности выделять из сыворотки высокоочищенные иммуноглобулины, а также предложены способы получения высокоспецифических (моноспецифических) антител.

В основе всех серологических реакций лежит иммунологическое взаимодействие между антигенами и антителами, в результате чего образуется комплекс антиген – антитело. Антигены – генетически чужеродные вещества, которые при введении в организм животного (и человека) вызывают специфическую перестройку лимфоретикулярной ткани, сопровождающуюся продукцией (выработкой) антител. Различают антигены корпускулярные, или клеточные (бактерии, эритроциты), и растворимые (молекулярно – дисперсные). Антигены поливалентны – имеют несколько детерминантных рецепторов для связи с антителами и способны вступать в реакцию с ними как в организме животного (in vivo), так и вне организма – в пробирке (in vitro).

Антитела – высокомолекулярные белки глобулиновой фракции сыворотки крови (иммуноглобулины). По проявлению феномена взаимодействия между антигеном и антителами in vitro различают: осадочные (прямые) реакции, лизирующие и нейтрализирующие. Антитела, участвующие в осадочных реакциях, получили название, по своему взаимодействию с антигеном: агглютинины – вызывают склеивание корпускулярного антигена – агглютиногена и осаждение комплекса антиген – антитело (агглютината); преципитины – образуют преципитат с растворимым антигеном – преципитиногеном.

В реакциях лизиса участвуют антитела бактериолизины и гемолизины, обуславливающие распад корпускулярного антигена. Нейтрализирующие антитела обезвреживают токсичное действие антигена (токсина).

Осадочные серологические реакции протекают в две фазы: первая фаза – специфическая, невидимая простым глазом, при ней происходит образование комплекса антиген – антитело, во второй фазе – неспецифической (физико–химической) – проявляется конечный эффект – видимый результат, осаждение агглютината.

В ветеринарной и медицинской практике серологические реакции как методы диагностики инфекционных болезней применяются:

Серологические реакции применяют также для оценки естественно и искусственно приобретенного организмом животного иммунитета.

1.2. СТРОЕНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ

Антитела (иммуноглобулины) – продукты гуморального имунного ответа, это глобулины, специфически реагирующие с антигеном, вызвавшим их образование. Это сложные белковые образования, мономеры или полимеры.

По физико–химическим и антигенным свойствам иммуноглобулины делятся на классы: G, M, A, E, D.

Молекула иммуноглобулина G построена из 2 тяжелых (Н–цепей) и 2 легких полипептидных цепей (L–цепей).

Каждая полипептидная цепь состоит из вариабельной (V), стабильной (константной, С) и так называемой шарнирной частей.

Тяжелые цепи иммуноглобулинов разных классов построены из разных полипептидов (гамма–, мю–, альфа–, дельта–, эпсилон–пептидов) и потому являются разными антигенами.

Рис. 1 Легкие цепи представлены 2 типами полипептидов – каппа– и лямбда–пептидами.

Вариабельные участки значительно короче константных участков. Каждая пара легких и тяжелых полипептидных цепей в их С–частях, а также тяжелые цепи между собой связаны дисульфидными мостиками.

Ни тяжелые, ни легкие цепи свойствами антител (взаимодействие с гаптенами) не обладают. При гидролизе папаином молекула иммуноглобулина G распадается на 3 фрагмента – 2 Fab–фрагмента и Fс–фрагмент.

Последний представляет собой остатки тяжелых цепей, их константные части. Он не обладает свойством антитела (не взаимодействует с антигеном), но обладает сродством к комплементу, способен фиксировать и активировать его. В связи с этим фрагмент и обозначается как Fс–фрагмент (фрагмент комплемента). Этот же Fс–фрагмент обеспечивает прохождение иммуноглобулинов G через гематоэнцефалический или плацентарный барьеры.

Два других фрагмента иммуноглобулина G представляют собой остатки тяжелой и легкой цепи с их вариабельными частями. Они идентичны друг другу и обладают свойством антител (взаимодействуют с антигеном), в связи с этим эти фрагменты и обозначаются как Fab,–(фрагмент–антитело).

Поскольку ни тяжелые, ни легкие цепи не обладают свойством антитела, но оно выявляется у Fаb–фрагментов, очевидно, что за взаимодействие с антигеном ответственны именно вариабельные части тяжелых и легких цепей. Они формируют уникальную по строению и пространственной организации структуру – активный центр антитела. Каждый активный центр любого иммуноглобулина соответствует детерминантной группе соответствующего антигена как «ключ замку.

Молекула иммуноглобулина G имеет 2 активных центра. Поскольку строение активных центров иммуноглобулинов одного класса, но разной специфичности неодинаково, то эти молекулы (антитела одного класса, но разной специфичности) являются разными антителами. Эти различия обозначаются как идиотипические различия иммуноглобулинов, или идиотипы.

Молекулы иммуноглобулинов других классов построены по тому же принципу, что и IgG, т. е. из мономеров, имеющих 2 тяжелых и 2 легких цепи, но иммуноглобулины класса М являются пентамерами (построены из 5 таких мономеров), а иммуноглобулины класса А – димерами или тетрамерами.

Количество мономеров, входящих в состав молекулы того или иного класса иммуноглобулина, определяет ее молекулярную массу. Самые тяжелые – это IgM, самые легкие – IgG, вследствие чего они и проходят через плаценту.

Очевидно также то, что иммуноглобулины разных классов имеют разное число активных центров: у IgG их 2, а у IgM – 10. В связи с этим они способны связать разное число молекул антигена, и скорость этого связывания будет различной.

Скорость связывания иммуноглобулинов с антигеном – это их авидность.

Прочность этой связи обозначают как аффинитет.

IgM высокоавидны, но низкоафинны, IgG – наоборот, низко–авидны, но высокоафинны.

Если в молекуле антитела функционирует лишь один активный центр, она может связаться лишь с одной антигенной де–терминантой без последующего образования сетевой структуры комплексов антиген – антитело. Такие антитела называются неполными. Они не дают видимых на глаз реакций, но тормозят реакцию антигена с полными антителами.

Неполные антитела играют важную роль в развитии резус–конфликта, аутоиммунных заболеваний (коллагенозы) и др. и выявляются с помощью реакции Кумбса (антиглобулиновый тест).

Рис. 2. Классы иммуноглобулинов

Выделяют следующие классы иммуноглобулинов: JgM, JgJ, JgA, JgD, JgE. JgM – этот вид антител появляется самым первым при контакте с антигеном (микробом), повышение их титра в крови свидетельствует об остром воспалительном процессе, JgM играют важную защитную роль при проникновении бактерий в кровь на ранних стадиях инфекции.

JgJ – антитела этого класса появляются через какое–то время после того, как произошел контакт с антигеном. Они участвуют в борьбе с микробами – образуют комплексы с антигенами на поверхности бактериальной клетки. В дальнейшем к ним присоединяются другие белки плазмы (так называемый комплемент), и бактериальная клетка лизируется (ее оболочка разрывается). Кроме того, JgJ участвуют в возникновении некоторых аллергических реакций. Они составляют 80 % всех иммуноглобулинов человека, являются главным защитным фактором у ребенка первых недель жизни, так как обладают способностью проходить через плацентарный барьер в сыворотку крови плода. При естественном вскармливании антитела из молока матери через слизистую оболочку кишечника новорожденного проникают в его кровь.v

JgA – вырабатываются лимфоцитами слизистых оболочек в ответ на местное воздействие чужеродного агента, таким образом они защищают слизистые оболочки от микроорганизмов и аллергенов. JgA тормозят прилипание микроорганизмов к поверхности клеток и тем самым препятствуют проникновению микробов во внутреннюю среду организма. Именно это предупреждает развитие хронического местного воспаления.

JgD менее всего изучен. Исследователи предполагают, что он участвует в аутоиммунных процессах организма.

JgE – антитела этого класса взаимодействуют с рецепторами, которые располагаются на тучных клетках и базофилах. В результате происходит освобождение гистамина и других медиаторов аллергии, вследствие чего развивается аллергическая реакция. При повторном контакте с аллергеном взаимодействие JgE происходит на поверхности клеток крови, что приводит к развитию анафилактической аллергической реакции. Помимо реакций аллергии, JgE принимают участие в обеспечении противоглистного иммунитета.

1.3. ЗАЩИТНАЯ РОЛЬ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ РАЗНЫХ КЛАССОВ

Иммуноглобулины класса Е (реагины) реализуют развитие аллергических реакций немедленного типа (гиперчувствительность немедленного типа – ГНТ). К FаЬ–фрагментам фиксированных в тканях реагинов (Fс–фрагмент связан с рецепторами тканевых базофилов) присоединяются поступающие в организм аллергены (антигены), что приводит к освобождению биологически активных веществ, запускающих развитие аллергических реакций. При аллергических реакциях тканевые базо–филы повреждаются комплексом антиген – антитело и выделяют гранулы, содержащие гистамин и другие биологически активные вещества.

Иммуноглобулины класса А могут быть:

Последние отличаются наличием секреторного компонента (бета–глобулина), присоединяющегося к молекуле иммуноглобулина при его прохождении через эпителиальные клетки слизистой.

Секреторные иммуноглобулины играют существенную роль в местном иммунитете, препятствуя адгезии микроорганизмов на слизистых оболочках, стимулируют фагоцитоз и активируют комплемент, могут проникать в слюну, молозиво.

Иммуноглобулины класса М первыми синтезируют в ответ на антигенное раздражение. Они способны связывать большое количество антигенов и играют важную роль в формировании антибактериального и антитоксического иммунитета. Большую часть сывороточных антител составляют иммуноглобулины класса G, на долю которых приходится до 80% всех иммуноглобулинов. Они образуются на высоте первичного и вторичного иммунного ответа и определяют напряженность иммунитета против бактерий и вирусов. Кроме того, они способны проникать через плацентарный и гематоэнцефалический барьер. Иммуноглобулины класса D, в отличие от иммуноглобулинов других классов, содержат N–ацетилгалактозоамин и неспособны фиксировать комплемент. Уровень IgD повышается при миеломной болезни и хронических воспалительных процессах.

В основе всех реакций иммунитета лежит специфическое взаимодействие антитела (Ат) с антигеном (Аг). Эти реакции называют серологическими, так как для их постановки используют сыворотки (serum), содержащие Ат. В серологических реакциях один компонент (ингредиент) должен быть всегда известен. Серологические реакции применяются в следующих случаях:

В зависимости от состояния Аг и особенностей среды, в которой взаимодействуют Аг и Ат, различают реакции агглютинации, преципитации, лизиса, связывания комплемента, иммунофлюоресценции, иммуноферментного анализа, радиоиммунного анализа и другие.

© ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»

Источник

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ. Группы

1. Серологические реакции и их практическое применение

Серологические реакции – это реакции, протекающие между антигеном и антителом «in vitro» в электролитной среде. Серологические реакции используют в диагностике инфекционных заболеваний, так как они позволяют обнаружить наличие антител (в сыворотке крови пациента) к антигенам возбудителя, антигенов возбудителя в исследуемом материале, а также определить антигенную структуру микроорганизма (то есть идентифицировать возбудителя). Для постановки серологических реакций, направленных на выявление антител к возбудителю, необходимы диагностические препараты «диагностикумы» – препараты, содержащие антигены определенного микроорганизма

Все серологические реакции условно можно разделить на три группы:

1. Прямые, при которых образующиеся комплексы антиген-антитело видны невооруженным глазом. К ним относят реакции агглютинации (РА) и реакции преципитации (РП).

2. Опосредованные (не прямые), в таких реакциях образование комплексов антиген-антитело определяют с помощью эритроцитов. Примером такой реакции является реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

3. Реакции, в которых для обнаружения комплексов антиген-антитело используют меченые антитела (антигены). В качестве метки могут выступать флуоресцентные красители, ферменты

2.Реакция агглютинации, ее разновидности. Цель и техника постановки.

Реакция агглютинации протекает, когда антиген находится в корпускулярном состоянии. Реакция протекает в две фазы. В первую фазу (специфическую) образуется комплекс антиген-антитело, во вторую фазу (неспецифическую) этот комплекс выпадает в осадок – агглютинат.

Существуют два варианта постановки РА: 1. Пластинчатый (на предметном стекле), носит качественный характер, используют для определения антигенов исследуемого микроорганизма. Результат реакции оценивают по интенсивности агглютинации в «+». 2. Пробирочный (развернутый), применяют для определения количества антител в сыворотке больного. Сыворотку больного последовательно разводят в ряде пробирок. Последнее разведение сыворотки, при котором определяется четкая агглютинация, соответствует титру антител.

Методика учета пробирочной реакции агглютинации Сначала определяют титр антител на первой неделе заболевания. Для этого каждую пробирку с разведениями сыворотки пациента сравнивают с контролем диагностикума (жидкость в пробирке должна быть мутной) и контролем сыворотки (жидкость в пробирке должна быть прозрачной). Агглютинацию учитывают по наличию осадка. Титром антител считают последнее разведение сыворотки, где обнаружена агглютинация. Затем определяют титр антител на второй неделе заболевания и сравнивают титры. Увеличение титра не менее чем в четыре раза указывает на наличие заболевания у пациента.

Методика постановки реакции агглютинации на стекле На предметное стекло наносят каплю физиологического раствора и помещают в нее неизвестную культуру, размешивают, затем добавляют каплю поливалентной ОВ-коли сыворотки. О наличии агглютинации свидетельствует появление зерен или хлопьев. Интенсивность реакции оценивают в «+» и дают заключение о принадлежности возбудителя к виду E. coli. По той же схеме проводят реакцию с типовыми сыворотками и определяют принадлежность к серотипу.

3. Получение и применение диагностикумов и агглютинирующих сывороток.

Диагностикумы представляют собой взвесь цельных убитых микроорганизмов или их антигенных фракций, которые получают путем дезинтеграции (разрушения) микробной клетки. Дезинтеграцию осуществляют разными способами (ультразвуковым, механическим, с помощью детергентов и др.), после чего выделяют капсульные, жгутиковые или соматические антигенные фракции. Применение

Агглютинирующую сыворотку получают гипериммунизацией кроликов взвесью бактерий. В сыворотке определяют титр антител. Титром агглютинирующей сыворотки называется то макси-мальное разведение ее, при котором происходит агглютинация с соответствующим микроорганизмом. Агглютинирующие неадсорбированные сыворотки применяются при идентифи-кации бактерий сначала в ориентировочной реакции агглютинации на стекле, далее в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.

4. Реакция непрямой гемагглютинации. Получение и применение эритроцитарных диагностикумов.

Реакция непрямой гемагглютинации – реакция, позволяющая обнаружить антитела (антигены) с помощью антигенов (антител), адсорбированных на поверхности эритроцитов (такие препараты называют эритроцитарными диагностикумами). При наличии специфичных антител происходит их связывание с антигенами, адсорбированными на поверхности эритроцитов. Результатом такого взаимодействия является агглютинация эритроцитов, она хорошо визуализируется в виде осадка с неровными фестончатыми краями («зонтик»), об отсутствии агглютинации говорит наличие осадка с четким ровным краем («диск» или «пуговка»)

Эритроцитарные диагностикумы получают путем адсорбции на поверхности отмытых эритроцитов барана антигенов микроорганизмов или вирусов.

Применение Сущность указанной реакции заключается в том, что эритроциты животных после адсорбции на их поверхности антигенов различной природы приобретают новую серологическую специфичность, вследствие чего могут агглютинироваться в присутствии специфических антител. Эта реакция испытана при диагностике ряда бактериальных и вирусных инфекций, в том числе и при бруцеллезе.

Методика учета реакции непрямой гемагглютинации с эритроцитарным диагностикумом Определяют титр антител на первой и второй неделях заболевания по последнему разведению сыворотки, в котором имеется осадок эритроцитов «зонтик». Сравнивают титры между собой, отмечая увеличение, делают заключение о наличии заболевания, если титр увеличился не менее чем в четыре раза.

5. Реакция преципитации. Цель и техника постановки. Реакция преципитации в геле.

Реакция преципитации (РП) протекает, когда антиген находится в мелкодисперсном состоянии. Механизм РП заключается в формировании и осаждении комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом (от лат. praecipito – осаждать). Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др

Реакция преципитации в геле: 1% осветленный агар разливают в чашки Петри или на предметные стекла. В разные лунки, сделанные в агаре, наливают растворы антигена и антитела, которые диффундируют навстречу друг другу, образуя линии преципитации.

Методика учета реакции преципитации в геле. Определить наличие линий преципитации между кружком фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической сывороткой, и колониями возбудителей дифтерии (контрольным, токсигенным и исследуемыми).

ИФА применяют для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных болезней, в частности для диагностики сальмонеллеза, микоплазмозов и др., а также определения гормонов, ферментов, лекарственных препаратов и других биологически активных веществ, содержащихся в исследуемом материале в минорных концентрациях

.Конкурентный ИФА для определения антигенов: искомый антиген(1) и меченый ферментом антиген(2) конкурируют друг с другом за антитела (3), сорбированные на твердой фазе. для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

Источник