Что значит оксидаза положительные
Типы биохимических тестов, для чего они нужны и какое значение
биохимические тесты в микробиологии они представляют собой набор химических тестов, которые проводятся на микроорганизмах, присутствующих в образце, для их идентификации; Эти микроорганизмы обычно являются бактериями. Существует большое количество биохимических тестов, доступных для микробиолога.
Тем не менее, выбор этих тестов основан на предварительных результатах, таких как картина окраски по Граму и признаки роста, которые позволяют бактериям относиться к определенной категории. Биохимические тесты основаны главным образом на метаболических свойствах каждого типа бактерий..
Не все бактерии имеют одинаковые свойства, поэтому исследуют, имеют ли они какой-либо конкретный фермент, добавляя субстрат и ожидая реакции. Обычно это определение определяется изменением цвета или pH в культуральной среде..
Для надежной идентификации бактерии до уровня вида часто требуется менее 15 биохимических тестов. Выполнение большего количества биохимических тестов может повысить уверенность в идентификации.
Большинство из этих биохимических тестов проводятся в сыворотке или плазме крови. Тем не менее, они также могут быть выполнены в других биологических выделениях, таких как моча, спинномозговая жидкость, плевральная жидкость и стул, среди других..
классификация
Биохимические тесты можно разделить на 3 группы:
универсальный
Это тесты, которые могут быть выполнены на любом образце и которые направляют микробиолога на следующие биохимические тесты, которые необходимо выполнить, чтобы получить надежную идентификацию..
пример
Тест каталазы и оксидазы.
дифференциалы
Это тесты, которые проводятся для выявления микроорганизмов, присутствующих в образце до уровня видов.
Идентификация производится на основе результатов комбинации тестов, поскольку отдельные результаты не достаточно информативны, чтобы сделать идентификацию.
пример
IMViC тесты и тесты на утилизацию сахара.
специфические
Это специфические тесты для определенного набора видов или для подтипа вида. Эти тесты обычно проводятся для подтверждения или идентификации на уровне подвидов. Индивидуальные тесты сами по себе информативны.
пример
Тест на γ-глутамиламинопептидазу.
Типы биохимических тестов
Тест каталазы
Если наблюдаются пузырьки кислорода, это означает, что бактерия обладает ферментом каталазы, потому что она катализирует разложение перекиси водорода на кислород и воду. Тогда говорят, что организм является положительным каталазой (например: Золотистый стафилококк).
Тест на оксидазу
Этот тест используется для идентификации микроорганизмов, которые содержат фермент цитохромоксидазу (важный в цепи транспорта электронов). Обычно используется для различия между семействами Enterobacteriaceae и Pseudomadaceae..
Цитохромоксидаза переносит электроны из цепи переноса электронов в кислород (конечный акцептор электронов) и восстанавливает его до воды. Тесты на оксидазу дают искусственные молекулы доноров и акцепторов электронов.
Когда донор электронов окисляется под действием цитохромоксидазы, среда становится темно-фиолетовой и считается положительным результатом. Микроорганизм Pseudomonas aeruginosa является примером положительной оксидазы бактерии.
Соленый маннитовый агаровый тест (MSA)
Этот тип теста является выборочным и дифференциальным. MSA выберет организмы, способные жить в средах с высокой концентрацией соли, таких как виды стафилококк в отличие от видов стрептококк, чей рост тормозится в этих условиях.
Дифференциальным компонентом в этом тесте является сахарный маннит. Организмы, способные использовать маннит в качестве источника пищи, будут производить побочные продукты брожения, которые являются кислыми и, следовательно, будут понижать рН среды.
Кислотность среды приводит к тому, что индикатор pH, феноловый красный, желтеет. Примерами видов бактерий, которые можно дифференцировать этим методом, являются: Золотистый стафилококк (положительно, потому что он ферментирует маннит) и Стафилококк эпидермидис (отрицательно, потому что маннит не ферментируется).
Коагулазный тест
Образование сгустков вокруг инфекции, вызванной этой бактерией, вероятно, защищает ее от фагоцитоза. Этот тест очень полезен, когда вы хотите различить Золотистый стафилококк других видов стафилококк которые являются негативной коагулазой.
Тест на уреазу
Этот тест используется для выявления бактерий, способных гидролизовать мочевину, с помощью фермента уреазы. Обычно используется для различения пола Протей других кишечных бактерий.
Гидролиз мочевины производит аммиак как один из его продуктов. Это слабое основание увеличивает pH среды выше 8,4, а индикатор pH (феноловый красный) меняется с желтого на розовый. Примером положительной уреазной бактерии является Proteus mirabilis.
Для чего нужны биохимические тесты??
Биохимические тесты в микробиологии используются для диагностики заболеваний, вызванных микробами, и для мониторинга лечения, направленного на борьбу с ними. Кроме того, они используются для скрининга инфекционных заболеваний и для их прогноза..
Биохимическая идентификация микроорганизмов дает представление о том, на что способны эти микроорганизмы, поскольку возможно различение разных штаммов одного и того же вида по определенным биохимическим профилям..
Различия в специфических ферментативных действиях сообщают об экологии, физиологии или естественной среде обитания микроорганизма, что в некоторых случаях может считаться важной информацией.
важность
Структурные различия в отношении формы, размера и расположения бактерий очень мало помогают в процессе идентификации, поскольку существует много видов бактерий, которые имеют сходную форму, размер и расположение..
По этой причине, в конечном счете, идентификация бактерий основана главным образом на различиях в их биохимической активности..
Каждый вид бактерий обладает четко определенным набором метаболических активностей, отличным от всех других видов. Эти биохимические «отпечатки пальцев» являются свойствами, контролируемыми бактериальными ферментами.
Таким образом, биохимические тесты важны, потому что они помогают исследователю правильно идентифицировать патогенные микроорганизмы, присутствующие в образце, и, таким образом, иметь возможность рекомендовать соответствующее лечение пациенту..
Санитарный контроль
в пищевой промышленности
Исследование воды (часть 4)
Оксидазный тест предназначен для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитных бактерий, которые обладают активной оксидазой и окисляют фенилендиаминовые соединения до индофенола, окрашивающего колонии в ярко-синий цвет.
Для определения оксидазной активности бактерий готовят специальный реактив: 30—40 мг α-нафтола растворяют в 2,5 мл ректификованного этилового спирта, добавляют 7,5 мл дистиллированной воды и 40—60 мг диметил-n-фенилендиамина. Реактив готовят непосредственно перед определением.
Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, обильно смоченный реактивом. Через 2—4 мин оценивают результат.
Колонии посиневшие или с синим ободком относят к семейству Pseudomonadaceae и при анализе не учитывают.
Колонии, не изменившие своего первоначального цвета, — оксида-зоотрицательные, относят к семейству Enterobacteriaceae. Отсутствие оксидазы у темно-красных с металлическим блеском и без него колоний грамотрицательных палочек позволяет дать положительный ответ о наличии бактерий группы кишечных палочек и закончить исследование воды подсчетом оксидазоотрицательных колоний и вычислением коли-индекса.
При обнаружении на фильтрах розовых и бесцветных колоний грамотрицательных палочек с отрицательной оксидазной активностью их подсчитывают и 2—3 изолированных колонии каждого типа высевают в полужидкую среду с глюкозой. Культивируют при 37°С и проводят учет через 4—5 ч. Наличие кислоты и газа в полужидкой среде с глюкозой подтверждает принадлежность этих бактерий к группе кишечных палочек.
Коли-индекс вычисляют следующим образом. Количество бактерий группы кишечных палочек, выросших при посеве исследуемого объема воды, умножают на 1000 мл и делят на весь объем исследуемой воды.
Если на одном из фильтров наблюдается сплошной рост бактерий и подсчет их невозможен, то коли-индекс вычисляют по тому объему, в котором на фильтре выросли изолированные колонии. Например, в 100 мл посеянного объема из фильтре сплошной рост бактерий, в объеме 10 мл на фильтре выросло 12 колоний бактерий кишечной палочки, следовательно, коли-индекс равен (12·1000) : 10= 1200.
Метод бродильных проб. Сущность метода заключается в следующем. Производят посев определенных объемов исследуемой воды в глюкозо- или лактозопептонные среды и культивируют при 37°С в течение 24 ч. Затем высевают на среду Эндо, изучают выросшие колонии и по табл. 16, 17, 18 определяют наиболее вероятное число бактерий группы кишечных палочек в 1 л воды.
Воду методом бродильных проб исследуют в три этапа. На первом этапе определенные объемы исследуемой воды высевают во флаконы и пробирки с глюкозопептонной средой и индикатором. Флаконы (пробирки) снабжены поплавками для учета газообоазования. Посев 100 и 10 мл воды производят во флаконы и пробирки с 10 и 1 мл концентрированной среды; посев 1 и 0,1 мл воды — в пробирки с 10 мл среды нормальной концентрации. Посевы культивируют при 37°С в течение 24 ч.
На втором этапе исследования из флаконов и пробирок, где отмечено помутнение, образование кислоты и газа, производят высев бактериологической петлей штрихами на поверхность среды Эндо (предварительно чашку со средой Эндо со стороны дна делят на секторы). Посевы культивируют при 37°С 18—24 ч.
В оксидазный тест это тест, используемый в микробиология чтобы определить, есть ли бактерия производит определенные цитохром с оксидазы. [1] В нем используются диски, пропитанные реагент Такие как N, N, N ′, N ′-тетраметил-п-фенилендиамин (TMPD) или N, N-диметил-п-фенилендиамин (DMPD), который также является редокс индикатор. Реагент темно-синий до бордовый цвет при окислении и бесцветный при восстановлении. Оксидаза-положительные бактерии обладают цитохромоксидазой или индофенолоксидазой (железосодержащим гемопротеином). [2] Оба они катализируют перенос электронов от донорных соединений (НАДН) к акцепторам электронов (обычно к кислороду). Тестовый реагент, дигидрохлорид TMPD, действует как искусственный донор электронов для фермента оксидазы. Окисленный реагент образует окрашенное соединение индофеноловый синий. Система цитохрома обычно присутствует только в аэробных организмах, которые способны использовать кислород в качестве конечного акцептора электронов. Конечным продуктом этого метаболизма является вода или перекись водорода (расщепляется на каталаза). [3]
Содержание
Классификация
Штаммы могут быть либо оксидазо-положительными (OX +), либо оксидазо-отрицательными (OX-).
OX + обычно означает, что бактерия содержит цитохром с оксидазу (также известную как. Комплекс IV) и поэтому может использовать кислород для производства энергии путем преобразования O2 к H2О2 или H2O с цепь переноса электронов.
Многие грамотрицательные палочки с изогнутой спиралью также являются оксидазоположительными, в том числе Helicobacter pylori, Холерный вибрион, и Campylobacter jejuni.
OX- обычно означает, что бактерия не содержит цитохром с оксидазу и, следовательно, не может использовать кислород для производства энергии с цепь переноса электронов или использует другой цитохром для переноса электронов на кислород.
Процедуры
В качестве альтернативы живые бактерии, культивируемые на триптиказо-соевый агар тарелки могут быть приготовлены с использованием стерильная техника с посевом в одну линию. Засеянные чашки инкубируют при 37 ° C в течение 24–48 часов для образования колоний. Следует использовать свежие бактериальные препараты. После того, как колонии вырастут на среде, на поверхность каждого тестируемого организма добавляют 2-3 капли реагента DMPD.
Рекомендации
Американское общество микробиологии, протокол теста на оксидазу. 2013. ASM MicrobeLibrary, 1–9.
Ченг В. Дж., Лин С. В., Ву Т. Г., Су С. С., Се М. С. 2013. Калибровка тест-полосок на основе глюкозооксидазы для измерения капиллярной крови с образцами венозной крови, насыщенной кислородом. Clinica Chimica Acta. 415, 152–157.
Corchia L, Hubault R, Quinquenel B, N’Guyen. 2015. Быстро развивающийся конъюнктивит, вызванный Pasteurella Multocida, возникающий после прямой инокуляции капельками животных на хозяина с ослабленным иммунитетом. BMC Ophthalmology 15.1, 21.
Флок С., Аларкон-Гутьеррес Э., Крике С. 2007. Анализ ABTS активности фенолоксидазы в почве. Журнал микробиологических методов. 71, 319–324.
Габи В. Л., Хэдли С. 1957. Практический лабораторный тест для идентификации синегнойной палочки. Журнал бактериологии. 74, 356–358.
Гилани М., Мунир Т., Латиф М., Гилани М., Рехман С., Ансари М., Хафиз А., Наджиб С., Саад Н. 2015. Эффективность дорипенема in vitro против Pseudomonas Aeruginosa и Acinetobacter Baumannii с помощью E-теста. Журнал Колледжа врачей и хирургов Пакистан 25, 726-729.
Иванова Н.В., Землак Т.С., Ханнер Р.Х., Хеберт П.Д. Н. 2007. Универсальные коктейли праймеров для штрих-кодирования ДНК рыб. Заметки о молекулярной экологии. 7, 544–54.
Принц С. 2009. Практическое руководство по медицинской микробиологии (Jaypee Brothers Medical Publishers (P) Ltd.) 112–112.
Стил К. Дж. 1961. Оксидазная реакция как таксономический инструмент. Журнал общей микробиологии. 25, 297–306.
Zanderigo F et al. 2018. [11C] Связывание гармина с моноаминоксидазой A головного мозга: свойства повторного тестирования и неинвазивная количественная оценка. Молекулярная визуализация и биология. 20, 667–681.
Оксидазы
Смотреть что такое «Оксидазы» в других словарях:
Оксидазы — Оксидазы окислительные ферменты класса оксидоредуктаз[1]. В настоящее время найдено очень много разнообразных окислительных ферментов, как растительного, так и животного происхождения[2]. В живых клетках оксидазы служат катализаторами… … Википедия
ОКСИДАЗЫ — ферменты класса оксидоредуктаз, катализирующие во всех живых клетках окислительно восстановительные реакции, акцептором водорода в которых служит кислород … Большой Энциклопедический словарь
ОКСИДАЗЫ — ферменты класса оксидоредуктаз, катализирующие окислит. восстановит. реакции, акцепторами водорода в к рых служит кислород воздуха. При этом образуется вода или перекись водорода (Н2О2). Коферментом многих О. являются производные витамина В2 ФАД… … Биологический энциклопедический словарь
оксидазы — ферменты класса оксидоредуктаз, катализирующие во всех живых клетках окислительно восстановительные реакции, акцептором водорода в которых служит кислород. * * * ОКСИДАЗЫ ОКСИДАЗЫ, ферменты класса оксидоредуктаз, катализирующие во всех живых… … Энциклопедический словарь
Оксидазы — ферменты класса оксидоредуктаз (См. Оксидоредуктазы); широко распространены в природе, катализируют в живых клетках окислительно восстановительные реакции, в которых акцептором водорода служит кислород воздуха. При переносе на O2 водорода … Большая советская энциклопедия
Оксидазы — окислительные ферменты. В настоящее время найдено очень много разнообразных окислительных ферментов, как растительного, так и животного происхождения. В большинстве случаев каждый из них исполняет свою определенную функцию. Напр., тирозиназа,… … Энциклопедический словарь Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона
ОКСИДАЗЫ — ферменты класса оксидоредуктаз, катализирующие во всех живых клетках окислит. восстановит. реакции, акцептором водорода в к рых служит кислород … Естествознание. Энциклопедический словарь
оксидазы — оксид азы, аз, ед. ч. аза, ы … Русский орфографический словарь
Тест на оксидазу используется для определения наличия в организме фермента цитохромоксидазы. Тест используется в качестве вспомогательного средства для дифференциации видов Neisseria, Moraxella, Campylobacter и Pasteurella (положительный результат на оксидазу). Он также используется для дифференциации псевдомонад от родственных видов.
СОДЕРЖАНИЕ
Классификация
Штаммы могут быть либо оксидазо-положительными (OX +), либо оксидазо-отрицательными (OX-).
Legionella pneumophila может быть оксидазно-положительной.
OX- обычно означает, что бактерия не содержит цитохром-с-оксидазу и, следовательно, либо не может использовать кислород для производства энергии с цепью переноса электронов, либо использует другой цитохром для передачи электронов кислороду.
Энтеробактерии обычно представляют собой OX−.
Процедуры
В качестве альтернативы живые бактерии, культивируемые на чашках с триптиказо-соевым агаром, могут быть получены с использованием стерильной методики с посевом в одну линию. Засеянные чашки инкубируют при 37 ° C в течение 24–48 часов для образования колоний. Следует использовать свежие бактериальные препараты. После того, как колонии вырастут на среде, на поверхность каждого тестируемого организма добавляют 2-3 капли реагента DMPD.
Рекомендации
Американское общество микробиологии, протокол теста на оксидазу. 2013. ASM MicrobeLibrary, 1–9.
Cheng WJ, Lin CW, Wu TG, Su CS, Hsieh M. S. 2013. Калибровка тест-полосок на основе глюкозооксидазы для измерения капиллярной крови с образцами венозной крови, насыщенной кислородом. Clinica Chimica Acta. 415, 152–157.
Corchia L, Hubault R, Quinquenel B, N’Guyen. 2015. Быстро развивающийся конъюнктивит, вызванный Pasteurella Multocida, возникающий после прямой инокуляции капельками животных в хозяине с ослабленным иммунитетом. BMC Ophthalmology 15.1, 21.
Флок С., Аларкон-Гутьеррес Э., Крике С. 2007. Анализ ABTS активности фенолоксидазы в почве. Журнал микробиологических методов. 71, 319–324.
Габи В.Л., Хэдли С. 1957. Практический лабораторный тест для идентификации синегнойной палочки. Журнал бактериологии. 74, 356–358.
Гилани М., Мунир Т., Латиф М., Гилани М., Рехман С., Ансари М., Хафиз А., Наджиб С., Саад Н. 2015. Эффективность дорипенема in vitro против Pseudomonas Aeruginosa и Acinetobacter Baumannii с помощью E-теста. Журнал Колледжа врачей и хирургов Пакистан 25, 726-729.
Иванова Н.В., Землак Т.С., Ханнер Р.Х., Хеберт П.Д. Н. 2007. Универсальные коктейли праймеров для штрих-кодирования ДНК рыб. Заметки о молекулярной экологии. 7, 544–54.
Принц С. 2009. Практическое руководство по медицинской микробиологии (Jaypee Brothers Medical Publishers (P) Ltd.) 112–112.
Стил К. Дж. 1961. Оксидазная реакция как таксономический инструмент. Журнал общей микробиологии. 25, 297–306.
Zanderigo F et al. 2018. [11C] Связывание гармина с моноаминоксидазой A в мозге: свойства повторного тестирования и неинвазивная количественная оценка. Молекулярная визуализация и биология. 20, 667–681.